人胸腺激酶缺陷性細(xì)胞系
人胸腺激酶缺陷性細(xì)胞系（Human Thymidine Kinase Deficient Cell Line, TK? Cell Line），源自人正常細(xì)胞經(jīng)基因編輯（CRISPR/Cas9）敲除TK1/TK2基因構(gòu)建，或從胸腺激酶缺陷相關(guān)疾病患者樣本中分離培養(yǎng)，經(jīng)TK蛋白免疫印跡（Western blot）、PCR測序驗(yàn)證，確認(rèn)胸腺激酶表達(dá)缺失，無HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、真菌污染。該細(xì)胞系為貼壁/懸浮生長（因株系而異），核心特征是無法合成內(nèi)源性胸腺嘧啶核苷激酶，依賴外源性胸腺嘧啶核苷維持DNA復(fù)制，對(duì)胸苷類似物（如溴脫氧尿苷BrdU、碘脫氧尿苷IUdR）具有抗性；廣泛應(yīng)用于基因編輯驗(yàn)證、病毒載體篩選、抗腫瘤藥物敏感性檢測、胸腺激酶缺陷癥（TK2d）相關(guān)機(jī)制研究及免疫細(xì)胞功能研究，是分子生物學(xué)、腫瘤學(xué)、遺傳病學(xué)及免疫學(xué)基礎(chǔ)科研與臨床轉(zhuǎn)化的核心工具細(xì)胞，可輔助探索Tal1等基因在細(xì)胞增殖中的調(diào)控作用及TK2d相關(guān)疾病的治療靶點(diǎn)篩選。
檢測原理
本細(xì)胞系的核心培養(yǎng)原理，聚焦胸腺激酶缺陷后的代謝特性與生長需求：采用含外源性胸腺嘧啶核苷（終濃度20-50 μg/mL）的專用培養(yǎng)基，彌補(bǔ)細(xì)胞自身TK合成缺陷，保障DNA復(fù)制與細(xì)胞增殖；貼壁株系需用膠原I包被培養(yǎng)器皿，懸浮株系可直接接種于常規(guī)培養(yǎng)瓶；37℃、5% CO?、飽和濕度培養(yǎng)箱保障細(xì)胞代謝穩(wěn)定，避免溫度波動(dòng)影響細(xì)胞活性。培養(yǎng)流程規(guī)范：復(fù)蘇后按1×10?–2×10? cells/cm2接種，貼壁株系靜置6–8小時(shí)完成貼壁，懸浮株系輕柔混勻后培養(yǎng)；換液時(shí)貼壁株系操作輕柔避免沖擊，懸浮株系離心后更換新鮮培養(yǎng)基；傳代時(shí)貼壁株系用0.05% Trypsin-EDTA溫和消化，鏡下細(xì)胞間隙擴(kuò)大、邊緣變圓立即終止，懸浮株系直接離心傳代；可通過添加胸苷類似物（BrdU）驗(yàn)證細(xì)胞缺陷特性，未缺陷細(xì)胞會(huì)因攝入類似物導(dǎo)致DNA損傷死亡，缺陷細(xì)胞可正常存活。
產(chǎn)品特點(diǎn)
本產(chǎn)品針對(duì)該細(xì)胞系的培養(yǎng)與研究需求優(yōu)化制備，核心特點(diǎn)如下：1. 缺陷特性明確：經(jīng)Western blot、PCR測序雙重驗(yàn)證，胸腺激酶（TK1/TK2）表達(dá)wan全缺失，缺陷穩(wěn)定性高，傳代后仍保持缺陷表型，對(duì)胸苷類似物抗性穩(wěn)定；2. 質(zhì)控嚴(yán)格：每批次均通過無菌、支原體、病毒檢測及缺陷特性驗(yàn)證，附完整QC報(bào)告，確保細(xì)胞純度＞98%，無雜細(xì)胞污染；3. 培養(yǎng)友好：適配常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)設(shè)備，專用培養(yǎng)基配方標(biāo)準(zhǔn)化，含外源性胸腺嘧啶核苷，無需額外復(fù)雜配制，貼壁株系貼壁速度快，懸浮株系分散性好，復(fù)蘇存活率＞85%；4. 增殖可控：在專用培養(yǎng)基中可穩(wěn)定傳代5–6代，保持缺陷特性與細(xì)胞形態(tài)穩(wěn)定，可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求調(diào)控增殖速度；5. 樣本適配場景廣：可用于基因編輯驗(yàn)證、病毒載體篩選、抗腫瘤藥物敏感性檢測、TK相關(guān)代謝機(jī)制研究、免疫熒光、Western blot、qPCR、細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)、共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)，適配胸腺激酶缺陷癥相關(guān)研究及腫瘤分子機(jī)制研究；6. 儲(chǔ)存運(yùn)輸便捷：凍存細(xì)胞采用程序降溫，干冰運(yùn)輸，-196℃液氮可長期保存，復(fù)蘇流程簡單，新手易操作，適配長期科研實(shí)驗(yàn)需求。
適用樣本類型
本細(xì)胞系適配多種分子生物學(xué)、腫瘤學(xué)及遺傳病學(xué)研究的樣本與實(shí)驗(yàn)體系，適用樣本/實(shí)驗(yàn)場景包括：基因編輯細(xì)胞模型驗(yàn)證、病毒載體（如腺病毒、慢病毒）篩選與包裝、抗腫瘤藥物（尤其是胸苷類似物類藥物）敏感性檢測、胸腺激酶缺陷癥（TK2d）相關(guān)代謝機(jī)制研究、細(xì)胞增殖調(diào)控實(shí)驗(yàn)（如Tal1基因相關(guān)增殖研究）、基因轉(zhuǎn)染/沉默、免疫共沉淀、細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)、體內(nèi)移植模型樣本制備。推薦培養(yǎng)體系：貼壁株系用膠原I包被的T25/T75培養(yǎng)瓶，懸浮株系用常規(guī)培養(yǎng)瓶；專用TK缺陷細(xì)胞培養(yǎng)基（含20-50 μg/mL胸腺嘧啶核苷），37℃、5% CO?培養(yǎng)箱；細(xì)胞接種密度1.5×10? cells/cm2，2-3天換液一次，匯合度70%-80%時(shí)進(jìn)行傳代；缺陷驗(yàn)證可使用BrdU（終濃度10 μg/mL）處理，觀察細(xì)胞存活情況。
備注：（具體樣本處理方法請(qǐng)參考產(chǎn)品說明書）
儲(chǔ)存與注意事項(xiàng)
（一）儲(chǔ)存條件
1. 凍存細(xì)胞需置于-196℃液氮中長期保存，嚴(yán)禁-20℃直接冷凍或常溫放置，避免溫度波動(dòng)導(dǎo)致細(xì)胞死亡，影響缺陷特性穩(wěn)定性；2. 配套專用TK缺陷細(xì)胞培養(yǎng)基開封后4℃避光保存，1個(gè)月內(nèi)用完；外源性胸腺嘧啶核苷需分裝后-20℃凍存，避免反復(fù)凍融，防止失效；3. 膠原包被液、yi酶-EDTA、BrdU等試劑需按說明書溫度儲(chǔ)存，BrdU需避光保存，防止降解影響缺陷驗(yàn)證效果；4. 所有試劑儲(chǔ)存期間避免劇烈震蕩，確?；钚苑€(wěn)定，稀釋后的試劑密封冷藏，盡快使用，避免影響細(xì)胞增殖。
（二）注意事項(xiàng)
1. 本產(chǎn)品僅供科研使用，嚴(yán)禁用于人體臨床治療或直接注射，操作時(shí)嚴(yán)格遵循無菌操作規(guī)范，佩戴PPE，避免細(xì)胞及培養(yǎng)基接觸皮膚黏膜；2. 復(fù)蘇時(shí)先將凍存管置于37℃水浴快速融化（1–2分鐘），嚴(yán)禁反復(fù)凍融；貼壁株系接種后靜置6小時(shí)再首ci換液，避免未貼壁細(xì)胞流失，懸浮株系復(fù)蘇后輕柔混勻即可培養(yǎng)；3. 貼壁株系對(duì)yi酶敏感，消化時(shí)間嚴(yán)格控制在1–2分鐘，鏡下觀察到細(xì)胞邊緣變圓、間隙增大立即終止，用含血清培養(yǎng)基或大豆yi酶抑制劑中和，防止損傷細(xì)胞；4. 培養(yǎng)過程中需確保培養(yǎng)基中胸腺嘧啶核苷濃度穩(wěn)定，缺失會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞增殖停滯、死亡；培養(yǎng)基開封后4℃避光保存，1個(gè)月內(nèi)用完，胸腺嘧啶核苷分裝-20℃凍存；5. 培養(yǎng)過程中避免頻繁移動(dòng)培養(yǎng)瓶，貼壁株系防止細(xì)胞脫落，懸浮株系避免劇烈震蕩；若出現(xiàn)細(xì)胞聚團(tuán)、生長緩慢，及時(shí)檢查胸腺嘧啶核苷濃度、培養(yǎng)基pH值與污染情況；6. 廢棄細(xì)胞、培養(yǎng)基、耗材按生物安全規(guī)范處理，高壓滅菌后丟棄，尤其藥物處理、病毒感染實(shí)驗(yàn)后的廢棄物需雙重消毒；7. 嚴(yán)格按說明書操作，若有培養(yǎng)、缺陷驗(yàn)證相關(guān)問題，可聯(lián)系廠家獲取技術(shù)支持，確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性，適配胸腺激酶缺陷相關(guān)研究及藥物篩選實(shí)驗(yàn)。
訂購信息
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以上信息僅供參考，具體請(qǐng)已產(chǎn)品說明書為準(zhǔn)。
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