產(chǎn)品系統(tǒng)PRODUCT CENTER
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首頁-產(chǎn)品系統(tǒng)-細(xì)胞-原代細(xì)胞-視網(wǎng)膜星形膠質(zhì)細(xì)胞


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質(zhì)量保障
Quality Assurance產(chǎn)品分類
PRODUCT CLASSIFICATION技術(shù)文章
TECHNICAL ARTICLES
詳細(xì)介紹
純度高:細(xì)胞純度≥95%,經(jīng)形態(tài)學(xué)鑒定、免疫組化染色及微生物檢測(細(xì)菌、真菌、支原體、病毒),均無雜細(xì)胞及微生物污染,可直接用于實驗,能有效保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性和重復(fù)性;
生物學(xué)特性穩(wěn)定:細(xì)胞貼壁性好、增殖能力穩(wěn)定,原代細(xì)胞可傳代3-5代,永生化細(xì)胞系連續(xù)傳代15-20代后,仍能保持其典型形態(tài)、特異性標(biāo)志物表達(dá)及生理功能,無明顯變異,實驗重復(fù)性強(qiáng);
功能完整性:嚴(yán)格保留其核心生理功能,可穩(wěn)定分泌神經(jīng)營養(yǎng)因子、黏附分子,對炎癥刺激具有正常應(yīng)答能力,能真實模擬體內(nèi)其營養(yǎng)支持、免疫調(diào)控及屏障維持功能,實驗結(jié)果具有良好的生理相關(guān)性;
操作便捷:采用標(biāo)準(zhǔn)化培養(yǎng)體系,解凍后可快速復(fù)蘇(復(fù)蘇存活率≥85%),培養(yǎng)條件溫和(常規(guī)37℃、5% CO?培養(yǎng)),無需特殊試劑及復(fù)雜操作,適合常規(guī)實驗室培養(yǎng)與操作,降低實驗門檻,同時可參考標(biāo)準(zhǔn)化細(xì)胞培養(yǎng)流程進(jìn)行復(fù)蘇、傳代操作;
適用性廣:可用于多種科研場景,包括視網(wǎng)膜神經(jīng)生物學(xué)研究、視網(wǎng)膜損傷修復(fù)機(jī)制探究、神經(jīng)退行性眼?。ㄇ喙庋邸⒁暰W(wǎng)膜變性)模型構(gòu)建、神經(jīng)營養(yǎng)及神經(jīng)保護(hù)類藥物篩選、炎癥反應(yīng)機(jī)制研究等,滿足不同科研需求,同時可用于細(xì)胞共培養(yǎng)、細(xì)胞凍存與復(fù)蘇相關(guān)實驗等場景。
細(xì)胞生物學(xué)實驗:包括細(xì)胞增殖、凋亡、周期、分化及突起生長等基礎(chǔ)實驗,用于研究其生物學(xué)行為及功能特性,可開展細(xì)胞消化、傳代、凍存等相關(guān)操作優(yōu)化實驗;
藥物篩選與藥效評估:用于神經(jīng)營養(yǎng)藥物、神經(jīng)保護(hù)藥物、抗炎藥物的體外篩選,檢測藥物對細(xì)胞增殖、凋亡及神經(jīng)營養(yǎng)因子/炎癥因子分泌的影響,評估藥物療效,為視網(wǎng)膜相關(guān)疾病的藥物研發(fā)提供支撐;
分子生物學(xué)實驗:用于視網(wǎng)膜相關(guān)基因、蛋白(如GFAP、S100β、BDNF)表達(dá)檢測,如RT-PCR、Western blot、免疫組化等實驗,探究其在眼病發(fā)病、損傷修復(fù)中的分子機(jī)制,為視網(wǎng)膜神經(jīng)退行性疾病的診治研究提供新思路;
臨床相關(guān)研究:用于模擬視網(wǎng)膜損傷、青光眼、視網(wǎng)膜變性等疾病的細(xì)胞模型,為疾病發(fā)病機(jī)制研究、臨床診斷標(biāo)志物篩選、治療方案優(yōu)化提供體外實驗支撐,可模擬其在疾病狀態(tài)下的功能異常及修復(fù)過程相關(guān)研究;
其他:可用于細(xì)胞共培養(yǎng)(如與視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞共培養(yǎng))、視網(wǎng)膜微環(huán)境構(gòu)建、細(xì)胞凍存與復(fù)蘇相關(guān)實驗等科研場景,具體應(yīng)用可結(jié)合實驗需求調(diào)整,同時可用于驗證玻璃化凍存等新型凍存技術(shù)對視網(wǎng)膜膠質(zhì)細(xì)胞的影響。
凍存細(xì)胞:置于-196℃液氮中長期儲存,優(yōu)先選擇處于對數(shù)生長期的細(xì)胞進(jìn)行凍存,凍存時需使用含20%FBS、10%DMSO的專用凍存液,儲存時需確保液氮液位穩(wěn)定,避免細(xì)胞反復(fù)凍融(凍融次數(shù)≤3次),否則會導(dǎo)致細(xì)胞活性下降、死亡或生物學(xué)特性改變,凍存后可在半年后復(fù)蘇檢測細(xì)胞存活率,確保細(xì)胞狀態(tài)良好,凍存細(xì)胞不宜長期存儲在-80℃環(huán)境中,應(yīng)盡快轉(zhuǎn)移至液氮罐中;
復(fù)蘇后細(xì)胞:復(fù)蘇后的細(xì)胞需立即放入37℃水浴鍋中快速晃動融化(時間控制在1分鐘內(nèi)),以1000r/min的速度離心5分鐘,去除凍存液中的DMSO后,接種至含wan全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中,置于37℃、5% CO?、飽和濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng),24-48小時后更換培養(yǎng)基,去除死細(xì)胞,新復(fù)蘇細(xì)胞24小時內(nèi)避免頻繁觀察和更換培養(yǎng)基,防止影響細(xì)胞貼壁,將培養(yǎng)瓶放入培養(yǎng)箱時,可輕輕旋松瓶蓋以保證氣體充分交換(若使用透氣性瓶蓋則無需旋松);
培養(yǎng)基儲存:配套wan全培養(yǎng)基需置于4℃冷藏儲存,避免高溫、強(qiáng)光直射,儲存期限不超過1個月,使用前需恢復(fù)至室溫并輕輕搖勻,解凍血清時需逐步解凍,避免快速變溫,防止產(chǎn)生血清沉淀物,血清中出現(xiàn)的纖維蛋白、磷酸鈣等沉淀物不影響細(xì)胞生長,可通過離心去除,除非必要,避免對血清進(jìn)行熱滅活處理;
運輸條件:細(xì)胞運輸采用干冰低溫運輸(-80℃),運輸過程中需做好防震、防潮措施,避免溫度波動,運輸時間不超過72小時,接收后立即放入對應(yīng)儲存環(huán)境,若無法立即儲存,可在干冰上暫時保存,避免常溫放置過久。
本產(chǎn)品僅用于科研,嚴(yán)禁用于臨床診斷、治療或其他非科研用途,嚴(yán)禁直接接觸人體或用于人體相關(guān)實驗,實驗過程中需嚴(yán)格遵循動物實驗相關(guān)倫理要求,未預(yù)約者不得進(jìn)行細(xì)胞實驗;
細(xì)胞復(fù)蘇、培養(yǎng)、傳代需嚴(yán)格遵循無菌操作原則,實驗環(huán)境需符合細(xì)胞培養(yǎng)要求,實驗器具需經(jīng)紫外燈照射30分鐘和通風(fēng)30分鐘后使用,操作前需用75%酒精對器具進(jìn)行消毒,避免微生物污染;傳代時需控制消化時間,當(dāng)細(xì)胞明顯變圓、細(xì)胞間隙增大并呈現(xiàn)流沙狀時停止消化,不同細(xì)胞消化時間可根據(jù)細(xì)胞特性調(diào)整,每隔30秒觀察一次細(xì)胞狀態(tài),避免過度消化損傷細(xì)胞,貼壁細(xì)胞傳代前需用5mL PBS輕輕潤洗細(xì)胞,避免沖擊細(xì)胞層,潤洗后吸去PBS再進(jìn)行消化操作;
細(xì)胞培養(yǎng)過程中,需定期觀察細(xì)胞形態(tài)、生長狀態(tài),若培養(yǎng)基出現(xiàn)偏紫,多為CO?溢出導(dǎo)致堿性增加,可輕輕旋松瓶蓋放入培養(yǎng)箱校正,變紫培養(yǎng)基可繼續(xù)使用;若培養(yǎng)液變黃或變濁,可能是細(xì)胞密度過高或細(xì)菌污染,需及時消化傳代或丟棄處理;若發(fā)現(xiàn)真菌或霉菌污染,需用紫外燈照射培養(yǎng)箱去除孢子,并進(jìn)行徹di消毒;
處理細(xì)胞支原體污染時,建議優(yōu)先更換新的細(xì)胞株,若細(xì)胞珍貴,可嘗試使用四環(huán)素、大環(huán)內(nèi)酯類抗生素等進(jìn)行治療,支原體污染易復(fù)發(fā),需做好后續(xù)監(jiān)測;
細(xì)胞換液時機(jī)可根據(jù)細(xì)胞狀態(tài)調(diào)整,傳代后隔天或隔兩天換液為宜,若死細(xì)胞較多可第二天換液,生長速度較慢的細(xì)胞可減少換液次數(shù),細(xì)胞分布不均時可消化重鋪;
凍存細(xì)胞時,需將細(xì)胞懸液以1000-1200r/min離心3-5分鐘,丟棄上清液后用預(yù)冷的凍存液重懸細(xì)胞,細(xì)胞密度控制在1×10?~1×10?個/ml,分裝后標(biāo)記細(xì)胞種類、凍存時間及操作人員,放入程序降溫盒置于-80℃過夜后,再轉(zhuǎn)移至液氮中長期儲存;
取出液氮罐中的細(xì)胞時,務(wù)必加強(qiáng)個人防護(hù),避免凍傷;取材及細(xì)胞操作時動作要輕,避免牽拉和擠壓造成細(xì)胞機(jī)械損傷,切忌用水直接沖洗細(xì)胞,可用0.1M PBS輕輕沖洗;
實驗過程中產(chǎn)生的細(xì)胞廢液、廢棄培養(yǎng)基及用過的培養(yǎng)耗材,需經(jīng)滅菌處理后再丟棄,避免生物污染;操作人員需穿戴無菌手套、口罩、實驗服,做好個人防護(hù),實驗結(jié)束后及時消毒實驗臺面。
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