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首頁-產(chǎn)品系統(tǒng)-細(xì)胞-細(xì)胞系-BY-1386B95-8絨猴EBV轉(zhuǎn)化的白細(xì)胞系

B95-8絨猴EBV轉(zhuǎn)化的白細(xì)胞系
產(chǎn)品型號(hào):BY-1386
簡要描述:

B95-8絨猴EBV轉(zhuǎn)化的白細(xì)胞系,B95-8 為絨猴白細(xì)胞經(jīng) EBV 轉(zhuǎn)化而來,淋巴母細(xì)胞樣,懸浮生長,分泌 EBV,表達(dá) CD21 等受體,適用于 EBV 研究、病毒分離及干擾素生產(chǎn)。

  • 廠家實(shí)力

    Manufacturer Strength
  • 有效保修

    Valid Warranty
  • 質(zhì)量保障

    Quality Assurance

詳細(xì)介紹

B95-8絨猴EBV轉(zhuǎn)化的白細(xì)胞系
B95-8絨猴EBV轉(zhuǎn)化的白細(xì)胞系,B95-8 細(xì)胞系是絨猴(狨猴)B 淋巴細(xì)胞經(jīng) EB 病毒(Epstein-Barr virus, EBV)轉(zhuǎn)化形成的永生化淋巴母細(xì)胞模型,因能持續(xù)分泌傳染性 EBV 顆粒、高表達(dá) EBV 相關(guān)抗原及 CD21 等受體,成為 EBV 生物學(xué)研究、病毒分離及干擾素生產(chǎn)的核心工具。其保留 B 淋巴細(xì)胞的免疫特性與病毒感染相容性,為皰疹病毒與宿主相互作用研究提供了du特的實(shí)驗(yàn)平臺(tái)。
一、細(xì)胞起源與生物學(xué)特性
  1. 來源與轉(zhuǎn)化機(jī)制

B95-8 源自 1970 年代分離的絨猴外周血 B 淋巴細(xì)胞,通過 EBV 體外感染轉(zhuǎn)化獲得(“B95" 代表原始分離編號(hào),“8" 為克隆株標(biāo)記)。該細(xì)胞系穩(wěn)定攜帶 EBV 基因組,其轉(zhuǎn)化機(jī)制與 EBV 編碼的潛伏膜蛋白 1(LMP1)和 EB 核抗原 2(EBNA2)相關(guān) ——LMP1 模擬腫瘤壞死因子受體信號(hào)通路,激活 NF-κB 等促增殖通路;EBNA2 則調(diào)控宿主細(xì)胞周期基因表達(dá),使細(xì)胞獲得無限增殖能力。
  1. 形態(tài)與生長特征

細(xì)胞呈典型淋巴母細(xì)胞樣形態(tài),圓形或橢圓形,胞質(zhì)少而核質(zhì)比高,以懸浮生長為主,可形成直徑 50-100μm 的細(xì)胞團(tuán)。在 37℃、5% CO?條件下,使用含 10% 胎牛血清的 RPMI 1640 培養(yǎng)基,倍增時(shí)間約 48-56 小時(shí),傳代比例 1:2 至 1:3,每周需換液 2 次以維持細(xì)胞密度在 5×10?-2×10? cells/mL。細(xì)胞凍存復(fù)蘇存活率超 85%,液氮保存 5 年后仍可穩(wěn)定分泌 EBV,病毒滴度無顯著下降。
  1. 遺傳與功能特性

  • 染色體核型:保留絨猴二倍體核型特征(2n=46),長期傳代后異倍體比例<15%,核型穩(wěn)定性優(yōu)于人類 EBV 轉(zhuǎn)化的 B 細(xì)胞系。

  • EBV 相關(guān)標(biāo)志物:持續(xù)表達(dá) EBV 潛伏抗原(EBNA1、LMP1)與早期抗原(EA),晚期抗原(VCA)表達(dá)率約 30%-40%(免疫熒光檢測),可自發(fā)釋放傳染性 EBV 顆粒(滴度 10?-10? PFU/mL)。

  • 受體表達(dá):高表達(dá) EBV 主要受體 CD21(陽性率>90%)及 B 細(xì)胞表面標(biāo)志物 CD19、CD20,支持 EBV 再次感染與復(fù)制。

二、核心應(yīng)用領(lǐng)域
  1. EBV 生物學(xué)研究

  • 病毒復(fù)制周期解析:B95-8 可通過丁酸鈉或巴佛洛霉素 A1 誘導(dǎo),使 EBV 從潛伏狀態(tài)進(jìn)入裂解期,實(shí)現(xiàn)病毒全生命周期的體外模擬。例如,通過誘導(dǎo)后不同時(shí)間點(diǎn)的轉(zhuǎn)錄組分析,已鑒定出 30 余個(gè)新的 EBV 裂解期調(diào)控基因,為理解病毒潛伏 - 裂解轉(zhuǎn)換機(jī)制提供關(guān)鍵數(shù)據(jù)。

  • 病毒顆粒制備:作為實(shí)驗(yàn)室 EBV 標(biāo)準(zhǔn)來源,其分泌的病毒顆??捎糜诟腥救?B 淋巴細(xì)胞,建立 EBV 轉(zhuǎn)化的永生化細(xì)胞模型(轉(zhuǎn)化效率約 10??-10?3),用于研究 EBV 與淋巴瘤、鼻咽癌發(fā)生的關(guān)聯(lián)。

  1. 干擾素生產(chǎn)與抗病毒研究

  • 天然干擾素制備:B95-8 在 EBV 刺激下可高表達(dá) Ⅰ 型干擾素(IFN-α/β),經(jīng)誘導(dǎo)后干擾素活性單位可達(dá) 10? IU/mL,是早期人用干擾素制劑的重要生產(chǎn)來源。其分泌的干擾素對 EBV、皰疹病毒等具有廣譜抑制作用,為天然抗病du藥物研發(fā)提供參考。

  • 抗病du藥物篩選:基于其 EBV 復(fù)制特性,可構(gòu)建藥物篩選模型。例如,通過檢測阿xi洛韋對 EBV DNA 聚合酶的抑制效果,測定藥物 EC??=2.5μM,與臨床療效相關(guān)性達(dá) 0.86,為抗 EBV 藥物評估提供可靠平臺(tái)。

  1. 疫苗研發(fā)與診斷試劑生產(chǎn)

  • EBV 疫苗候選抗原制備:B95-8 可高效表達(dá) EBV 糖蛋白 gp350(病毒主要包膜蛋白),重組 gp350 純度可達(dá) 95% 以上,已用于 EBV 疫苗的臨床前研究,動(dòng)物實(shí)驗(yàn)顯示其可誘導(dǎo)中和抗體效價(jià)達(dá) 1:10000 以上。

  • 診斷抗原制備:其表達(dá)的 EBV VCA、EA 可作為診斷抗原,用于傳染性單核細(xì)胞增多癥及 EBV 相關(guān)腫瘤的血清學(xué)檢測(如 ELISA 試劑盒),敏感性達(dá) 90%,特異性>95%。

三、培養(yǎng)與實(shí)驗(yàn)操作要點(diǎn)
  1. 基礎(chǔ)培養(yǎng)方案

  • 培養(yǎng)基:RPMI 1640 培養(yǎng)基添加 10% 胎牛血清,pH 維持在 7.2-7.4,可加入 2mM L - 谷an酰胺增強(qiáng)細(xì)胞活力。

  • 傳代流程:取對數(shù)生長期細(xì)胞懸液,1000rpm 離心 5 分鐘,棄上清后用新鮮培養(yǎng)基重懸,按 1:3 比例接種至新培養(yǎng)瓶,避免細(xì)胞密度過高導(dǎo)致凋亡(存活率<70%)。

  • 凍存保護(hù):取密度 1×10? cells/mL 的細(xì)胞懸液,加入等量含 20% DMSO 的wan全培養(yǎng)基(終濃度 10% DMSO),分裝后經(jīng)程序降溫盒 - 80℃過夜,轉(zhuǎn)移至液氮長期保存。

  1. EBV 誘導(dǎo)與收集

  • 裂解期誘導(dǎo):向?qū)?shù)期細(xì)胞中加入 3mM 丁酸鈉,37℃培養(yǎng) 48 小時(shí)后更換含 0.1μg/mL 巴佛洛霉素 A1 的培養(yǎng)基,繼續(xù)培養(yǎng) 24 小時(shí),EBV 分泌量可提升 5-10 倍。

  • 病毒收集:收集誘導(dǎo)后 72 小時(shí)的細(xì)胞上清,3000rpm 離心 30 分鐘去除細(xì)胞碎片,0.45μm 濾膜過濾后,-80℃分裝保存,使用前需通過噬斑實(shí)驗(yàn)測定滴度。

四、優(yōu)勢與局限性
  • 優(yōu)勢

  1. EBV 分泌穩(wěn)定:是目前唯yi能持續(xù)釋放高滴度傳染性 EBV 的細(xì)胞系,為 EBV 研究提供標(biāo)準(zhǔn)化病毒來源。

  1. 功能多樣性:既可用于病毒學(xué)基礎(chǔ)研究,又能生產(chǎn)干擾素與診斷抗原,應(yīng)用場景廣泛。

  1. 培養(yǎng)簡便:懸浮生長無需貼壁支持,適合大規(guī)模懸浮培養(yǎng),便于工業(yè)化生產(chǎn)。

  • 局限性

  1. 物種差異:作為絨猴細(xì)胞,其 EBV 復(fù)制調(diào)控機(jī)制與人類細(xì)胞存在差異,部分研究結(jié)果需在人源細(xì)胞中驗(yàn)證。

  1. 病毒安全性:分泌的 EBV 具有傳染性,操作需在生物安全二級實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行,避免實(shí)驗(yàn)室感染風(fēng)險(xiǎn)。

  1. 誘導(dǎo)效率波動(dòng):EBV 裂解期誘導(dǎo)效率受細(xì)胞代次影響(傳代>50 次時(shí)下降約 40%),需定期篩選高分泌亞克隆。

五、研究意義與展望

B95-8 細(xì)胞系的建立為 EBV 研究提供了里程碑式工具,其持續(xù)分泌 EBV 的特性推動(dòng)了 EBV 轉(zhuǎn)化機(jī)制、潛伏感染等基礎(chǔ)研究的突破,同時(shí)支撐了干擾素藥物與 EBV 診斷試劑的早期開發(fā)。當(dāng)前,該細(xì)胞系仍廣泛應(yīng)用于 EBV 疫苗研發(fā)、抗病di藥物篩選等領(lǐng)域,并通過基因編輯技術(shù)(如 CRISPR-Cas9 敲除 LMP1)構(gòu)建突變體模型,深入解析 EBV 致癌機(jī)制。未來,結(jié)合類器官技術(shù)與 B95-8 來源的 EBV,有望建立更接近體內(nèi)環(huán)境的 EBV 感染模型,為 EBV 相關(guān)疾病的防治提供新的研究思路與技術(shù)支撐。

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