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首頁(yè)-產(chǎn)品系統(tǒng)-細(xì)胞-細(xì)胞系-BY-1454SEP-K1小耳豬腎細(xì)胞系

SEP-K1小耳豬腎細(xì)胞系
產(chǎn)品型號(hào):BY-1454
簡(jiǎn)要描述:

SEP-K1小耳豬腎細(xì)胞系,上皮樣貼壁生長(zhǎng),高表達(dá)腎損傷修復(fù)因子,對(duì)腎嗜性病毒敏感,適用于腎損傷機(jī)制研究、抗病du藥物篩選及腎功能相關(guān)實(shí)驗(yàn)。

  • 廠家實(shí)力

    Manufacturer Strength
  • 有效保修

    Valid Warranty
  • 質(zhì)量保障

    Quality Assurance

詳細(xì)介紹

SEP-K1小耳豬腎細(xì)胞系
SEP-K1小耳豬腎細(xì)胞系,SEP-K1 細(xì)胞系是從小耳豬腎臟組織分離建立的上皮細(xì)胞系,因高表達(dá)腎損傷修復(fù)因子且對(duì)腎嗜性病毒具有特異性敏感性,成為豬腎臟損傷機(jī)制研究、抗病du藥物篩選及腎功能相關(guān)實(shí)驗(yàn)的核心模型。其與小耳豬腎實(shí)質(zhì)細(xì)胞的基因同源性達(dá) 98%,在模擬腎臟損傷修復(fù)、離子轉(zhuǎn)運(yùn)等方面表現(xiàn)突出,為解析腎臟疾病發(fā)病機(jī)制、開(kāi)發(fā)獸用護(hù)腎制劑提供了專屬平臺(tái),尤其在豬腎綜合征出血熱病毒(SFTSV)感染、急性腎損傷研究中具有不可替代的價(jià)值,與 SSC-S5 等皮膚細(xì)胞系形成豬源細(xì)胞研究的器官功能互補(bǔ)體系。
一、細(xì)胞起源與生物學(xué)特性
  1. 來(lái)源與建立背景

SEP-K1 細(xì)胞系源自 2019 年我國(guó)學(xué)者從 3 月齡健康小耳豬腎臟皮質(zhì)分離的原代上皮細(xì)胞,經(jīng)克隆純化獲得永生化株(“SEP" 代表小耳豬腎細(xì)胞,“K1" 為首ge克隆株)。該細(xì)胞系因能穩(wěn)定表達(dá)腎損傷修復(fù)相關(guān)因子,2021 年被確立為腎臟損傷研究的標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞系,解決了小型豬腎細(xì)胞體外模型缺乏的問(wèn)題,成為首ge能模擬小耳豬腎臟特異性功能的永生化細(xì)胞系。
  1. 形態(tài)與生長(zhǎng)特征

細(xì)胞呈典型上皮樣形態(tài),貼壁生長(zhǎng)時(shí)呈多邊形,排列呈腎小管樣結(jié)構(gòu)(與 SSC-S5 的成纖維樣長(zhǎng)梭形差異顯著),胞質(zhì)富含線粒體與刷狀緣結(jié)構(gòu),細(xì)胞核呈圓形(核質(zhì)比約 1:4.8),核仁清晰。在 37℃、5% CO?條件下,使用含 10% 胎牛血清的 MEM 培養(yǎng)基,倍增時(shí)間約 40-44 小時(shí)(短于 SSC-S5 的 46-50 小時(shí)),接種密度 1×10?個(gè) /mL 時(shí),72 小時(shí)密度達(dá) 1.6×10?個(gè) /mL(增殖能力優(yōu)于皮膚細(xì)胞系)。連續(xù)傳代 150 次后仍保持穩(wěn)定核型(38 條染色體),腎特異性功能標(biāo)志物表達(dá)無(wú)顯著下降,適合長(zhǎng)期腎臟功能實(shí)驗(yàn)。
  1. 功能特性

  • 腎特異性標(biāo)志物與修復(fù)因子:高表達(dá)腎臟特異性標(biāo)志物,如腎損傷分子 1(KIM-1,陽(yáng)性率 96%)、鈉葡萄糖共轉(zhuǎn)運(yùn)體 2(SGLT2,陽(yáng)性率 95%),其 KIM-1 在損傷后表達(dá)量可提升 5 倍(SSC-S5 無(wú)此特性);分泌肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)和表皮生長(zhǎng)因子(EGF),其中 HGF 含量達(dá) 35pg/10?細(xì)胞 / 天,能促進(jìn)腎上皮細(xì)胞遷移(遷移速率是靜止期細(xì)胞的 2.1 倍),模擬腎臟損傷后的修復(fù)啟動(dòng)過(guò)程,與小耳豬腎損傷組織的功能一致性達(dá) 90%。

  • 離子轉(zhuǎn)運(yùn)與代謝功能:具有活躍的鈉鉀離子轉(zhuǎn)運(yùn)能力,Na?/K?-ATPase 活性達(dá) 18μmol Pi/mg 蛋白 /h(顯著高于 SSC-S5),葡萄糖重吸收效率達(dá) 75%(接近在體腎小管功能);氨清除率達(dá) 0.7mmol/10?細(xì)胞 / 天,尿素合成量達(dá) 10μmol/10?細(xì)胞 / 天,維持水鹽代謝平衡的功能與小耳豬腎臟皮質(zhì)組織高度吻合。

  • 病毒敏感性譜:對(duì)腎嗜性病毒(如 SFTSV)的感染效率達(dá) 97%,感染后 60 小時(shí)出現(xiàn)典型細(xì)胞病變(細(xì)胞融合、胞質(zhì)內(nèi)包涵體),病毒滴度達(dá) 10?.? TCID??/mL(是 SSC-S5 細(xì)胞的 8 倍);因高表達(dá) SFTSV 受體 TAM 家族激酶,對(duì)腎臟靶向病毒的吸附效率顯著高于皮膚細(xì)胞系,尤其適合腎相關(guān)病毒病研究。

二、核心應(yīng)用領(lǐng)域
  1. 腎臟損傷機(jī)制研究

  • 急性腎損傷模型:通過(guò)該細(xì)胞系發(fā)現(xiàn)缺血再灌注可激活 TLR4/NF-κB 通路,使炎癥因子 IL-6 表達(dá)量提升 4 倍,KIM-1 陽(yáng)性率升至 85%,與小耳豬急性腎損傷的病理特征一致性達(dá) 92%(SSC-S5 模型無(wú)法模擬),揭示 “炎癥 - 損傷" 的腎臟病變軸。

  • 修復(fù)信號(hào)調(diào)控機(jī)制:在 HGF 干預(yù)實(shí)驗(yàn)中,細(xì)胞遷移速率提升 60%,凋亡率下降 50%,其下游 Akt 通路磷酸化水平增加 3 倍,證實(shí) HGF 在腎損傷修復(fù)中的關(guān)鍵作用,為護(hù)腎藥物研發(fā)提供靶點(diǎn)。

  1. 腎嗜性病毒感染研究

  • SFTSV 致腎損傷機(jī)制:利用其腎臟特異性,發(fā)現(xiàn) SFTSV 可抑制 SGLT2 功能(下降 40%),導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)葡萄糖蓄積,同時(shí)誘導(dǎo)炎癥小體 NLRP3 激活,使 IL-1β 分泌增加 3 倍,與 SFTSV 感染仔豬的腎間質(zhì)炎癥程度正相關(guān)(R2=0.91),研究結(jié)果較 SSC-S5 模型更接近在體狀態(tài)。

  • 抗病du藥物篩選:建立基于病毒復(fù)制抑制率的高通量模型,某核苷類似物可使 SEP-K1 細(xì)胞的 SFTSV 滴度下降 10?倍,且對(duì)細(xì)胞毒性較低(CC??/EC??比值達(dá) 20),小耳豬實(shí)驗(yàn)顯示該藥物可降低腎臟病毒載量 60%,證實(shí)模型的應(yīng)用價(jià)值。

  1. 腎功能調(diào)節(jié)劑開(kāi)發(fā)與評(píng)價(jià)

  • 護(hù)腎藥物活性檢測(cè):在shun鉑致腎損傷模型中,某中藥提取物可使細(xì)胞 KIM-1 表達(dá)下降 60%,Na?/K?-ATPase 活性恢復(fù)至正常水平的 80%,與小耳豬腎功能指標(biāo)(血肌酐下降 45%)的改善一致性達(dá) 89%(SSC-S5 模型僅 55%)。

  • 腎臟毒性評(píng)價(jià):作為獸藥腎毒性篩選的標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞系,其對(duì)氨基糖苷類抗生素的敏感性與小耳豬在體毒性的相關(guān)性達(dá) 93%,可在 72 小時(shí)內(nèi)完成藥物安全劑量評(píng)估,較動(dòng)物實(shí)驗(yàn)成本降低 70%。

三、培養(yǎng)與實(shí)驗(yàn)操作要點(diǎn)
  1. 基礎(chǔ)培養(yǎng)方案

  • 培養(yǎng)基:MEM 培養(yǎng)基添加 10% 胎牛血清、5ng/mL HGF,pH 維持在 7.2-7.4;為增強(qiáng)腎臟功能模擬,可添加 10μM 皮zhi醇,使 SGLT2 表達(dá)量提升 25%。

  • 傳代流程:當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá) 75% 時(shí),按 1:4 比例接種(高于 SSC-S5 的 1:3 比例),離心速度 800rpm,24 小時(shí)貼壁率超 93%,避免過(guò)度融合(>85% 會(huì)導(dǎo)致離子轉(zhuǎn)運(yùn)功能下降)。

  • 凍存保護(hù):采用含 10% DMSO 的wan全培養(yǎng)基,細(xì)胞密度 2×10?個(gè) /mL,程序降溫至 - 80℃過(guò)夜后轉(zhuǎn)入液氮,復(fù)蘇時(shí) 37℃水浴 1 分鐘,存活率可達(dá) 90%,需檢測(cè) KIM-1 表達(dá)確認(rèn)功能穩(wěn)定。

  1. 功能實(shí)驗(yàn)操作

  • 腎損傷模型構(gòu)建:細(xì)胞接種 24 孔板,用 10μM shun鉑處理 24 小時(shí),檢測(cè) LDH 釋放量(較正常組增加 3 倍)和 KIM-1 表達(dá),結(jié)果變異系數(shù)<6%;SSC-S5 對(duì)照組用于對(duì)比器官特異性差異。

  • 病毒感染實(shí)驗(yàn):接種 SFTSV(MOI=0.1)后,37℃培養(yǎng) 60 小時(shí),通過(guò) RT-PCR 檢測(cè)病毒 RNA 拷貝數(shù)(可達(dá) 10? copies/mL),適合抗病du藥物療效評(píng)估。

四、優(yōu)勢(shì)與局限性
  • 優(yōu)勢(shì)

  1. 腎臟功能特異性突出:是唯yi能模擬小耳豬腎臟損傷修復(fù)的細(xì)胞系,KIM-1 等標(biāo)志物表達(dá)與離子轉(zhuǎn)運(yùn)功能顯著優(yōu)于 SSC-S5 等皮膚細(xì)胞系,為腎臟研究提供專屬模型。

  1. 腎嗜性病毒敏感性高:對(duì) SFTSV 等腎臟靶向病毒的感染效率與復(fù)制支持能力居豬源細(xì)胞系首wei,病毒滴度是皮膚細(xì)胞系的 6-10 倍,大幅提升腎病毒病研究效率。

  1. 小型豬模型相關(guān)性強(qiáng):與小耳豬腎臟在體狀態(tài)的功能一致性達(dá) 90%,藥物腎毒性與護(hù)腎效果評(píng)價(jià)結(jié)果的臨床參考價(jià)值高,被國(guó)際比較醫(yī)學(xué)學(xué)會(huì)列為推薦細(xì)胞系。

  • 局限性

  1. 抗氧化功能較弱:SOD2 活性僅為 SSC-S5 的 30%,不適合氧化應(yīng)激相關(guān)研究,需與皮膚細(xì)胞系配合使用。

  1. 培養(yǎng)成本較高:對(duì)血清質(zhì)量要求嚴(yán)格,低成本血清會(huì)導(dǎo)致修復(fù)因子分泌下降 40%,培養(yǎng)成本是 SSC-S5 細(xì)胞的 1.3 倍。

  1. 組織特異性局限:對(duì)皮膚病毒(如豬痘病毒)的敏感性僅為 SSC-S5 的 20%,無(wú)法用于皮膚相關(guān)疾病研究。

五、研究意義與展望
SEP-K1 細(xì)胞系的建立為小型豬腎臟研究提供了精準(zhǔn)工具,其在 SFTSV 感染機(jī)制中的應(yīng)用,使小耳豬腎損傷模型的實(shí)驗(yàn)周期從 6 周縮短至 10 天。未來(lái),通過(guò)基因編輯技術(shù)敲除 TAM 受體,可構(gòu)建抗病毒研究的陰性對(duì)照模型;結(jié)合微流控芯片技術(shù)構(gòu)建 “腎小球 - 腎小管" 聯(lián)用模型,有望模擬腎臟的完整濾過(guò) - 重吸收功能。作為小耳豬腎細(xì)胞的代表,SEP-K1 與 SSC-S5 等皮膚細(xì)胞系形成 “內(nèi)臟 - 體表" 研究網(wǎng)絡(luò),共同推動(dòng)豬源細(xì)胞模型在腎臟疾病防控與比較醫(yī)學(xué)研究中的應(yīng)用。

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