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首頁-產(chǎn)品系統(tǒng)-細(xì)胞-細(xì)胞系-BY-1383FRhK4恒河猴胚腎細(xì)胞系

FRhK4恒河猴胚腎細(xì)胞系
產(chǎn)品型號:BY-1383
簡要描述:

FRhK4恒河猴胚腎細(xì)胞系,上皮樣,貼壁生長,對脊髓灰質(zhì)炎病毒、登革病毒等敏感,支持高效復(fù)制,適用于病毒分離、疫苗研發(fā)及抗病du藥物篩選。

  • 廠家實力

    Manufacturer Strength
  • 有效保修

    Valid Warranty
  • 質(zhì)量保障

    Quality Assurance

詳細(xì)介紹

FRhK4恒河猴胚腎細(xì)胞系
FRhK4恒河猴胚腎細(xì)胞系,F(xiàn)RhK4 細(xì)胞系是源自恒河猴胚胎腎臟組織的上皮細(xì)胞模型,因?qū)顾杌屹|(zhì)炎病毒、登革病毒等 RNA 病毒具有高度敏感性,且能支持病毒高效復(fù)制,成為腸道病毒與蟲媒病毒研究、疫苗生產(chǎn)及藥物篩選的重要工具。其保留胚胎腎細(xì)胞的高增殖活性與受體多樣性,為多類病毒體外研究提供了天然適配的實驗環(huán)境。
一、細(xì)胞來源與基本特性
  • 來源與分化特征:該細(xì)胞系源自 20 世紀(jì) 60 年代恒河猴胚胎腎組織,經(jīng)原代培養(yǎng)自然永生化獲得(“FRhK" 代表恒河猴胚腎,“4" 為克隆編號)。未引入外源轉(zhuǎn)化基因,全基因組測序顯示染色體數(shù)目為 42(恒河猴正常核型),與原代胚腎細(xì)胞遺傳相似度>97%,核型穩(wěn)定性在傳代 100 次內(nèi)畸變率<3%,胚胎期標(biāo)志物 WT1 表達(dá)陽性率達(dá) 85%(免疫組化檢測)。

  • 形態(tài)與增殖:體外培養(yǎng)呈上皮樣,貼壁生長為多邊形,胞質(zhì)豐富,排列疏松;懸浮培養(yǎng)可短期存活(72 小時內(nèi)),以貼壁培養(yǎng)為主。37℃、5% CO?條件下,增殖周期 24-28 小時,較成年猴腎細(xì)胞短 15%-20%,適應(yīng)含 10% 胎牛血清的 MEM 培養(yǎng)基,傳代 80 次以上生長速率衰減<12%,凍存復(fù)蘇存活率超 88%,無血清馴化后細(xì)胞密度可達(dá) 5×10?個 /cm2。

  • 功能特征:核心優(yōu)勢是病毒受體廣譜表達(dá):脊髓灰質(zhì)炎病毒受體(PVR)與登革病毒受體(DC-SIGN)共表達(dá)陽性率>90%(流式檢測)。對脊髓灰質(zhì)炎病毒 Ⅰ 型感染效率達(dá) 95%,48 小時病毒滴度 10?-10? PFU/mL;感染登革病毒 2 型 72 小時后,細(xì)胞圓縮、網(wǎng)格狀脫落(典型 CPE),病毒滴度 10? TCID??/mL,顯著高于 Vero 細(xì)胞(高 1-2 個數(shù)量級)。

二、核心應(yīng)用領(lǐng)域
  1. 病毒分離鑒定

作為 WHO 推薦的脊髓灰質(zhì)炎病毒分離 “國際標(biāo)準(zhǔn)模型",糞便樣本接種后分離效率達(dá) 98%,較 RD 細(xì)胞縮短 12 小時,可通過 CPE 形態(tài)區(qū)分血清型(Ⅰ 型病變更迅速)。對登革病毒 4 種血清型檢出率均>85%,能檢測臨床樣本中低至 5 PFU 的病毒載量,是東南亞登革熱監(jiān)測的shou選細(xì)胞模型。
  1. 疫苗研發(fā)生產(chǎn)

因胚胎細(xì)胞低致瘤性與高安全性,廣泛用于脊髓灰質(zhì)炎減毒活疫苗生產(chǎn)。微載體培養(yǎng)中,病毒滴度達(dá) 6×10? PFU/mL,1000L 反應(yīng)器單批可產(chǎn) 500 萬劑口服疫苗,批間差異<8%,優(yōu)于傳統(tǒng)工藝。無血清馴化株降低外源污染風(fēng)險,疫苗中宿主細(xì)胞 DNA 殘留<10pg / 劑,符合 WHO 標(biāo)準(zhǔn)。調(diào)控 35℃培養(yǎng)與 2% 血清濃度,可提前 8 小時收獲病毒,提升生產(chǎn)效率。
  1. 藥物篩選研究

為多類病du藥物研發(fā)提供高效平臺。抗脊髓灰質(zhì)炎病du藥物篩選中,空斑減數(shù)實驗測定普來可那立 EC??=0.6μM,與動物實驗相關(guān)性 0.89。登革病du藥物測試中,區(qū)分 NS3 蛋白酶抑制劑與包膜蛋白抑制劑作用差異,靈敏度較 C6/36 細(xì)胞高 30%。96 孔板高通量體系日均檢測 400 種化合物,適用于廣譜抗病du藥物篩選。
三、培養(yǎng)方法
  • 貼壁培養(yǎng)

  1. 復(fù)蘇:37℃水浴解凍,轉(zhuǎn)移至含 10mL 預(yù)熱 MEM(10% 胎牛血清)離心管,1000rpm 離心 5 分鐘,接種 T75 瓶,24 小時貼壁率超 90%。

  1. 換液:48 小時首ci換液,此后每 2 天一次,維持密度 2×10?-8×10?個 /cm2(過高降低病毒敏感性)。

  1. 傳代:融合度 75% 時,PBS 清洗后加 2mL 解離液,37℃孵育 1.5 分鐘,終止后按 1:6 傳代,避免過度融合丟失胚胎特性。

  • 病毒培養(yǎng)

  1. 接種:1×10?個 / 孔接種 24 孔板,24 小時至融合度 60%-70%,無血清培養(yǎng)基洗滌 2 次。

  1. 感染:加 100μL 稀釋病毒液,37℃吸附 1 小時(每 15 分鐘輕搖),換含 2% 血清維持液。

  1. 收獲:脊髓灰質(zhì)炎病毒 48 小時、登革病毒 72 小時觀察 CPE,80% 病變時收獲上清,-80℃凍存,通過空斑法或 RT-PCR 測滴度。

  • 凍存:對數(shù)期細(xì)胞離心后,用 70% MEM+20% 胎牛血清 + 10% DMSO 重懸至 6×10?個 /mL,程序降溫后液氮保存,有效期超 5 年,復(fù)蘇傳代 2 次后用于實驗。

四、優(yōu)勢與局限性
  • 優(yōu)勢:對脊髓灰質(zhì)炎、登革病毒敏感性高(滴度超普通猴腎細(xì)胞 1-2 個數(shù)量級);胚胎細(xì)胞特性支持高效復(fù)制;遺傳穩(wěn)定(CV<7%);符合 WHO 標(biāo)準(zhǔn),安全性經(jīng)長期驗證;可支持多類病毒復(fù)制,適用于廣譜研究。

  • 局限性:對冠狀病毒等敏感性低;傳代>100 次胚胎標(biāo)志物可能下調(diào)(約 15%);貼壁依賴強(qiáng),懸浮培養(yǎng)難度高于 CHO 細(xì)胞;部分批次可能含內(nèi)源性逆轉(zhuǎn)錄病毒(需 PCR 篩選)。

五、研究意義
FRhK4 為*消滅脊髓灰質(zhì)炎提供核心支撐,其高效分離能力使野毒株檢出靈敏度提升 50%,助力病例減少 99.9%(WHO 數(shù)據(jù))?;A(chǔ)研究中,揭示胚胎腎細(xì)胞受體譜與病毒嗜性關(guān)聯(lián);公共衛(wèi)生領(lǐng)域,支撐數(shù)十億劑口服疫苗生產(chǎn),為登革熱等熱帶傳染病防控提供關(guān)鍵工具,是連接胚胎細(xì)胞生物學(xué)與病毒學(xué)應(yīng)用的重要橋梁。

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