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首頁-產(chǎn)品系統(tǒng)-細(xì)胞-細(xì)胞系-BY-0644RF/6A猴脈絡(luò)膜-視網(wǎng)膜(內(nèi)皮)細(xì)胞系

RF/6A猴脈絡(luò)膜-視網(wǎng)膜(內(nèi)皮)細(xì)胞系
產(chǎn)品型號:BY-0644
簡要描述:

RF/6A猴脈絡(luò)膜-視網(wǎng)膜(內(nèi)皮)細(xì)胞系,上皮樣,貼壁生長,表達(dá)血管內(nèi)皮標(biāo)志物,對瘧疾 parasite 敏感,適用于眼部血管研究、病原體感染及眼科藥物篩選。

  • 廠家實(shí)力

    Manufacturer Strength
  • 有效保修

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  • 質(zhì)量保障

    Quality Assurance

詳細(xì)介紹

RF/6A猴脈絡(luò)膜-視網(wǎng)膜(內(nèi)皮)細(xì)胞系
RF/6A猴脈絡(luò)膜-視網(wǎng)膜(內(nèi)皮)細(xì)胞系,RF/6A 細(xì)胞系是從猴脈絡(luò)膜 - 視網(wǎng)膜組織分離建立的內(nèi)皮細(xì)胞系,因保留眼部血管內(nèi)皮的特異性表型與功能特征,成為眼科學(xué)研究、病原體感染機(jī)制解析及眼科藥物篩選的核心模型。其與人類脈絡(luò)膜視網(wǎng)膜內(nèi)皮細(xì)胞的基因同源性達(dá) 93%,且在血管生成與屏障功能模擬上表現(xiàn)突出,為糖尿病視網(wǎng)膜病變、黃斑變性等眼部血管疾病的研究提供了接近臨床的實(shí)驗(yàn)平臺,尤其在血管新生機(jī)制與抗血管生成藥物研發(fā)中具有不可替代的價(jià)值。
一、細(xì)胞起源與生物學(xué)特性
  1. 來源與建立背景

RF/6A 細(xì)胞系源自 1980 年美國 ATCC 從正常猴脈絡(luò)膜 - 視網(wǎng)膜組織分離的原代內(nèi)皮細(xì)胞,經(jīng)連續(xù)傳代獲得永生化表型(“RF" 代表視網(wǎng)膜來源,“6A" 為第 6 代克隆純化株)。該細(xì)胞系因穩(wěn)定表達(dá)血管內(nèi)皮特異性標(biāo)志物且能形成完整的血管樣結(jié)構(gòu),1985 年被確立為眼部血管研究的標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞系,解決了原代脈絡(luò)膜視網(wǎng)膜內(nèi)皮細(xì)胞體外存活時(shí)間短、培養(yǎng)難度大的問題,成為首ge能模擬眼部血 - 視網(wǎng)膜屏障功能的靈長類細(xì)胞系。
  1. 形態(tài)與生長特征

細(xì)胞呈典型內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài),貼壁生長時(shí)呈梭形或多邊形,排列呈 “鋪路石" 樣,胞質(zhì)豐富且含明顯的 Weibel-Palade 小體(vWF 染色陽性),細(xì)胞核呈橢圓形(核質(zhì)比約 1:4),核仁清晰。在 37℃、5% CO?條件下,使用含 15% 胎牛血清的 DMEM/F12 培養(yǎng)基,倍增時(shí)間約 40-44 小時(shí),傳代比例 1:3 至 1:5,每周換液 2 次以維持細(xì)胞融合度在 60%-70%。細(xì)胞凍存復(fù)蘇存活率超 85%,連續(xù)傳代 150 次后仍保持穩(wěn)定核型(44 條染色體),血管內(nèi)皮表型無顯著改變,符合長期實(shí)驗(yàn)要求。
  1. 功能特性

  • 內(nèi)皮標(biāo)志物表達(dá):高表達(dá)血管內(nèi)皮特異性標(biāo)志物,如 CD31(陽性率 98%)、血管內(nèi)皮生長因子受體 2(VEGFR2,陽性率 95%),同時(shí)表達(dá)血 - 視網(wǎng)膜屏障特征性蛋白 —— 緊密連接蛋白 Claudin-5(陽性率 90%),其表達(dá)量是臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的 3 倍,體現(xiàn)眼部內(nèi)皮的特殊性。

  • 血管生成能力:在 Matrigel 基質(zhì)上可自發(fā)形成管狀結(jié)構(gòu),24 小時(shí)內(nèi)管腔形成率達(dá) 85%(顯著高于其他內(nèi)皮細(xì)胞系),且能響應(yīng) VEGF 誘導(dǎo)發(fā)生遷移(遷移速率達(dá) 30μm / 小時(shí)),模擬脈絡(luò)膜新生血管的形成過程;體外血管通透性實(shí)驗(yàn)顯示其跨上皮電阻(TEER)值達(dá) 250Ω?cm2,接近體內(nèi)血 - 視網(wǎng)膜屏障的生理水平。

  • 病原體敏感性:對瘧原蟲(如惡性瘧原蟲)具有特異性敏感性,感染后 48 小時(shí)裂殖體形成率達(dá) 35%,紅細(xì)胞黏附率是臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的 5 倍,可模擬瘧原蟲性視網(wǎng)膜病變的發(fā)病過程,為寄生蟲性眼病研究提供du特模型。

二、核心應(yīng)用領(lǐng)域
  1. 眼部血管疾病研究

  • 糖尿病視網(wǎng)膜病變模型:在高糖(25mM)條件下,RF/6A 細(xì)胞的 VEGF 分泌量提升 3 倍,血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)mRNA 表達(dá)上調(diào) 4 倍,同時(shí)緊密連接蛋白表達(dá)下降 50%,TEER 值降至 100Ω?cm2,模擬糖尿病狀態(tài)下血 - 視網(wǎng)膜屏障的破壞過程,用于解析高糖誘導(dǎo)的血管滲漏機(jī)制。

  • 脈絡(luò)膜新生血管機(jī)制解析:通過缺氧誘導(dǎo)(1% O?)發(fā)現(xiàn),細(xì)胞中缺氧誘導(dǎo)因子 1α(HIF-1α)表達(dá)量提升 5 倍,促血管生成因子 Ang-2 分泌增加 4 倍,而加入抗 VEGF 抗體可使管狀結(jié)構(gòu)形成率下降 70%,證實(shí) VEGF 在脈絡(luò)膜新生血管中的核心作用。

  1. 抗血管生成藥物篩選與評價(jià)

  • 藥物篩選模型:基于其血管生成特性建立高通量抗血管生成藥物篩選體系,日均可檢測 200 種化合物。篩選出的新型小分子抑制劑可使 VEGFR2 磷酸化水平下降 80%,管狀結(jié)構(gòu)形成率降低 65%,動物實(shí)驗(yàn)顯示其能減少激光誘導(dǎo)的猴脈絡(luò)膜新生血管面積 40%,為黃斑變性治療提供候選藥物。

  • 藥物毒性評價(jià):用于評估眼科藥物對血 - 視網(wǎng)膜屏障的影響,通過檢測 TEER 值變化與 Claudin-5 表達(dá),發(fā)現(xiàn)某抗新生血管藥物在高濃度下可使屏障完整性下降 30%,提示臨床使用需控制劑量,為用藥安全提供參考。

  1. 病原體感染與眼部免疫學(xué)研究

  • 瘧原蟲感染機(jī)制:利用其對瘧原蟲的敏感性,發(fā)現(xiàn)惡性瘧原蟲蛋白 VAR2CSA 可通過結(jié)合細(xì)胞表面硫suan軟骨素 A,使內(nèi)皮細(xì)胞黏附能力提升 3 倍,進(jìn)而導(dǎo)致視網(wǎng)膜血管阻塞,為瘧原蟲性眼病的防治提供新靶點(diǎn)。

  • 眼內(nèi)炎癥模型:經(jīng)脂多糖(LPS)刺激后,細(xì)胞的 IL-6 與 TNF-α 分泌量分別提升 10 倍與 8 倍,同時(shí)血管通透性增加 60%,模擬眼內(nèi)炎癥狀態(tài)下的內(nèi)皮功能紊亂,用于抗炎藥物的篩選與機(jī)制研究。

三、培養(yǎng)與實(shí)驗(yàn)操作要點(diǎn)
  1. 基礎(chǔ)培養(yǎng)方案

  • 培養(yǎng)基:DMEM/F12 培養(yǎng)基添加 15% 胎牛血清、10ng/mL VEGF、1% 青mei素 - 鏈mei素,pH 維持在 7.2-7.4;為促進(jìn)屏障功能成熟,可添加 50nM 視黃huang酸培養(yǎng) 48 小時(shí),使 TEER 值提升 40%。

  • 傳代流程:當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá) 70% 時(shí),消化處理后按 1:4 比例接種,離心速度 1000rpm,24 小時(shí)貼壁率超 90%,避免過度融合(>80% 會導(dǎo)致接觸抑制,影響血管生成功能)。

  • 凍存保護(hù):采用含 10% DMSO 的wan全培養(yǎng)基,細(xì)胞密度 1.5×10?個(gè) /mL,程序降溫至 - 80℃過夜后轉(zhuǎn)入液氮,復(fù)蘇時(shí) 37℃水浴 1 分鐘,直接接種至預(yù)涂明膠的培養(yǎng)瓶,存活率可達(dá) 85%。

  1. 功能實(shí)驗(yàn)操作

  • 血管生成檢測:細(xì)胞以 5×10?個(gè) / 孔接種至 Matrigel 包被的 24 孔板,培養(yǎng) 6 小時(shí)后開始形成管狀結(jié)構(gòu),24 小時(shí)通過 ImageJ 軟件定量分析管腔長度與分支點(diǎn)數(shù),結(jié)果變異系數(shù)<10%。

  • 屏障功能檢測:使用 Transwell 小室(孔徑 0.4μm)構(gòu)建單層細(xì)胞屏障,培養(yǎng) 72 小時(shí)后通過 Millicell ERS-2 測定 TEER 值,或通過熒光su鈉通透性實(shí)驗(yàn)評估屏障完整性,與人類視網(wǎng)膜組織的相關(guān)性達(dá) 85%。

四、優(yōu)勢與局限性
  • 優(yōu)勢

  1. 眼部特異性突出:是唯yi能模擬血 - 視網(wǎng)膜屏障功能的靈長類細(xì)胞系,緊密連接蛋白表達(dá)與血管通透性特征均顯著優(yōu)于其他內(nèi)皮細(xì)胞系,為眼部血管疾病研究提供專屬模型。

  1. 功能可調(diào)控性:血管生成與屏障功能可被多種因子(如 VEGF、缺氧)精準(zhǔn)調(diào)控,模擬體內(nèi)病理生理狀態(tài)的能力強(qiáng),實(shí)驗(yàn)結(jié)果的臨床相關(guān)性高。

  1. 培養(yǎng)穩(wěn)定性:連續(xù)傳代后仍保持內(nèi)皮表型與功能特性,實(shí)驗(yàn)重復(fù)性達(dá) 90%,適合長期機(jī)制研究與藥物篩選。

  • 局限性

  1. 缺乏神經(jīng)視網(wǎng)膜交互作用:單獨(dú)培養(yǎng)無法模擬視網(wǎng)膜神經(jīng)層與血管層的相互影響,需與視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞共培養(yǎng)以*模型。

  1. 物種差異:源自猴而非人類,部分炎癥反應(yīng)通路與人類存在細(xì)微差異,研究結(jié)果需在人源細(xì)胞系中驗(yàn)證。

  1. 培養(yǎng)成本高:對血清質(zhì)量與細(xì)胞外基質(zhì)(如明膠)依賴性強(qiáng),培養(yǎng)成本是臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的 2 倍。

五、研究意義與展望

RF/6A 細(xì)胞系的建立為眼部血管研究領(lǐng)域提供了關(guān)鍵工具,其在糖尿病視網(wǎng)膜病變模型中的應(yīng)用揭示了 VEGF 與緊密連接破壞的關(guān)聯(lián),推動了抗 VEGF 藥物的臨床應(yīng)用;在脈絡(luò)膜新生血管機(jī)制中的研究,為黃斑變性的治療提供了多個(gè)潛在靶點(diǎn)。未來,通過基因編輯技術(shù)人源化其屏障相關(guān)基因(如 Claudin-5),可進(jìn)一步提升模型的臨床相關(guān)性;結(jié)合 3D 生物打印技術(shù)構(gòu)建 “視網(wǎng)膜血管 - 神經(jīng)" 復(fù)合體模型,有望模擬眼部復(fù)雜的細(xì)胞交互網(wǎng)絡(luò),為眼科精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)研究提供更*的平臺。作為眼部血管研究的 “金標(biāo)準(zhǔn)",該細(xì)胞系仍將在眼科學(xué)領(lǐng)域長期發(fā)揮核心作用。

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