產(chǎn)品系統(tǒng)PRODUCT CENTER
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首頁(yè)-產(chǎn)品系統(tǒng)-細(xì)胞-細(xì)胞系-BY-1407MM-L2獼猴肺細(xì)胞系


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質(zhì)量保障
Quality Assurance產(chǎn)品分類
PRODUCT CLASSIFICATION技術(shù)文章
TECHNICAL ARTICLES
詳細(xì)介紹
來源與建立背景
形態(tài)與生長(zhǎng)特征
功能特性
表型標(biāo)志物表達(dá):高表達(dá)肺泡 Ⅱ 型上皮細(xì)胞特異性標(biāo)志物,如表面活性蛋白 C(SP-C)、細(xì)胞角蛋白 19(CK19),免疫熒光陽(yáng)性率>95%;同時(shí)可分泌表面活性物質(zhì)(磷脂含量達(dá) 12μg/10?細(xì)胞 / 天),具有一定的肺泡表面張力調(diào)節(jié)功能,與原代肺泡上皮細(xì)胞水平相當(dāng)。
病毒敏感性:對(duì)多種呼吸道病毒具有高度敏感性,尤其對(duì)流感病毒(H1N1、H3N2)、呼吸道合胞病毒(RSV)的感染效率達(dá) 90% 以上,48 小時(shí)病毒滴度可達(dá) 10?-10? TCID??/mL,感染后 24 小時(shí)出現(xiàn)典型細(xì)胞病變(細(xì)胞融合、空泡形成、脫落);表達(dá)相關(guān)病毒受體與輔助因子,受體密度達(dá) 9×10?分子 / 細(xì)胞,為病毒入侵提供充足分子基礎(chǔ)。
肺功能模擬:在氣液界面培養(yǎng)條件下可分化為具有屏障功能的肺泡上皮單層,跨上皮電阻(TEER)達(dá) 300Ω?cm2,對(duì)氧氣與二氧化碳的交換效率達(dá)原代細(xì)胞的 70%,能響應(yīng)炎癥因子(如 TNF-α)刺激并分泌 IL-6、IL-8 等細(xì)胞因子,模擬肺部免疫應(yīng)答過程。
呼吸道病毒感染機(jī)制研究
病毒入侵與復(fù)制研究:利用 MM-L2 細(xì)胞解析呼吸道病毒的肺部感染機(jī)制,通過共聚焦顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn),病毒通過特定受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用進(jìn)入細(xì)胞,與相關(guān)蛋白酶介導(dǎo)的蛋白切割密切相關(guān),抑制該蛋白酶可使病毒入侵效率下降 75%,為開發(fā)入侵抑制劑提供靶點(diǎn)。
炎癥反應(yīng)調(diào)控研究:流感病毒感染后,MM-L2 細(xì)胞的 NF-κB 通路被激活,IL-6 分泌量在 24 小時(shí)內(nèi)提升 10 倍,同時(shí) NLRP3 炎癥小體激活導(dǎo)致 IL-1β 釋放增加,與人類流感患者的肺部炎癥特征高度一致,用于篩選抗炎 - 抗病毒聯(lián)合治療方案。
肺損傷與修復(fù)模型構(gòu)建
急性肺損傷模型:通過脂多糖(LPS)刺激建立急性肺損傷模型,MM-L2 細(xì)胞在 1μg/mL LPS 作用 24 小時(shí)后,細(xì)胞屏障完整性破壞(TEER 下降 60%),促炎因子分泌增加,同時(shí) SP-C 表達(dá)下調(diào) 50%,模擬肺泡上皮損傷過程,用于評(píng)估肺保護(hù)藥物的療效。
肺纖維化研究:在 TGF-β1 與 IL-13 聯(lián)合刺激下,MM-L2 細(xì)胞可發(fā)生上皮 - 間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT),α-SMA 表達(dá)上調(diào) 8 倍,膠原 Ⅰ 分泌量增加 4 倍,與特發(fā)性肺纖維化患者的肺泡上皮變化一致,為抗纖維化藥物篩選提供模型。
呼吸系統(tǒng)藥物篩選與評(píng)價(jià)
抗病du藥物篩選:基于對(duì)流感病毒的高敏感性,建立 96 孔板高通量篩選模型,日均可檢測(cè) 200 種化合物。篩選出的新型神經(jīng)氨酸酶抑制劑對(duì) H1N1 病毒的 EC??=0.3μM,選擇性指數(shù)>100,動(dòng)物實(shí)驗(yàn)顯示其可降低肺組織病毒載量 1000 倍,為抗流感藥物研發(fā)提供候選分子。
肺毒性評(píng)價(jià):可用于評(píng)估藥物的肺部安全性,通過檢測(cè)細(xì)胞活力、屏障功能及炎癥因子分泌,建立藥物肺毒性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)。例如,某hua療藥物在 5μg/mL 濃度下即可導(dǎo)致 MM-L2 細(xì)胞活力下降 50%,TEER 值降低 40%,與臨床報(bào)道的肺纖維化副作用一致,預(yù)測(cè)準(zhǔn)確率達(dá) 85%。
基礎(chǔ)培養(yǎng)方案
培養(yǎng)基:DMEM/F12(1:1)培養(yǎng)基添加 10% 胎牛血清、1% 非必需氨基酸,pH 維持在 7.2-7.4,可加入 10ng/mL 成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(FGF)促進(jìn)細(xì)胞增殖與表型維持。
傳代流程:當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá) 70%-80% 時(shí),棄舊培養(yǎng)基,PBS 洗滌 2 次,加入細(xì)胞解離液,37℃孵育 5-6 分鐘至細(xì)胞脫落,加入含血清的培養(yǎng)基終止解離,按 1:3 比例接種至新培養(yǎng)瓶,避免過度融合導(dǎo)致板層小體減少。
凍存保護(hù):取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞,用含 10% DMSO 的wan全培養(yǎng)基重懸至密度 1×10?個(gè) /mL,程序降溫后液氮保存,復(fù)蘇時(shí) 37℃水浴快速解凍,離心去除 DMSO 后接種,傳代 2 次待細(xì)胞狀態(tài)穩(wěn)定后使用。
病毒感染與功能實(shí)驗(yàn)操作
病毒接種:細(xì)胞以 4×10?個(gè) / 孔接種 24 孔板,培養(yǎng) 24 小時(shí)至融合度 60%,用無血清培養(yǎng)基稀釋病毒(MOI=0.01),37℃吸附 1.5 小時(shí),換含 2% 血清的維持液,72 小時(shí)后通過蝕斑實(shí)驗(yàn)測(cè)定病毒滴度,或通過免疫熒光檢測(cè)病毒核蛋白。
屏障功能檢測(cè):在 Transwell 小室中培養(yǎng)細(xì)胞至形成單層,使用上皮電阻儀測(cè)定 TEER 值,或通過特定熒光染料通透實(shí)驗(yàn)評(píng)估屏障完整性,以此反映肺泡上皮的損傷與修復(fù)狀態(tài)。
優(yōu)勢(shì):
靈長(zhǎng)類模型優(yōu)勢(shì):與人類肺上皮細(xì)胞的基因同源性達(dá) 95% 以上,生物學(xué)特征高度相似,研究結(jié)果的臨床轉(zhuǎn)化價(jià)值顯著高于嚙齒類模型。
功能完整性:保留肺泡上皮細(xì)胞的病毒敏感性與肺功能特征,可模擬體內(nèi)肺部的生理與病理過程,適合多領(lǐng)域研究。
應(yīng)用范圍廣:既可用于呼吸道病毒研究與疫苗開發(fā),又能支撐肺損傷修復(fù)與藥物篩選,適用場(chǎng)景多樣。
局限性:
來源限制:獼猴為保護(hù)動(dòng)物,細(xì)胞系獲取受倫理與資源限制,成本較高。
培養(yǎng)難度大:對(duì)培養(yǎng)環(huán)境敏感,氣液界面培養(yǎng)需特殊設(shè)備,增加實(shí)驗(yàn)操作復(fù)雜度。
結(jié)構(gòu)單一性:僅模擬肺泡上皮細(xì)胞功能,缺乏肺血管內(nèi)皮、免疫細(xì)胞等成分,無法wan全復(fù)制肺部復(fù)雜微環(huán)境。
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