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首頁-產(chǎn)品系統(tǒng)-細胞-細胞系-BY-1346CHO-D3b中國倉鼠卵巢細胞株細胞系

CHO-D3b中國倉鼠卵巢細胞株細胞系
產(chǎn)品型號：BY-1346
簡要描述：

CHO-D3b中國倉鼠卵巢細胞株細胞系，上皮樣，貼壁或懸浮生長，遺傳穩(wěn)定，蛋白表達高效且糖基化優(yōu)化，適用于復(fù)雜重組蛋白生產(chǎn)、藥物研發(fā)及工藝優(yōu)化，應(yīng)用價值顯著。

  • 廠家實力

    Manufacturer Strength

  • 有效保修

    Valid Warranty

  • 質(zhì)量保障

    Quality Assurance

詳細介紹

CHO-D3b中國倉鼠卵巢細胞株細胞系
CHO-D3b中國倉鼠卵巢細胞株細胞系是 CHO-D3a 的衍生優(yōu)化株系，通過基因編輯與馴化篩選進一步提升了糖基化修飾均一性與復(fù)雜蛋白分泌能力，因遺傳穩(wěn)定性優(yōu)異、蛋白表達高效且糖譜更接近人源，成為復(fù)雜重組蛋白與抗體藥物生產(chǎn)的進階細胞模型。其延續(xù) CHO 細胞上皮樣形態(tài)與雙生長模式適應(yīng)性，同時通過糖基轉(zhuǎn)移酶表達調(diào)控優(yōu)化，為需精準糖基化修飾的生物藥研發(fā)提供了高效平臺。
一、細胞來源與基本特性

  • 來源與優(yōu)化：該細胞系源自 CHO-D3a，通過 CRISPR/Cas9 技術(shù)微調(diào)關(guān)鍵糖基轉(zhuǎn)移酶（如 β-1,4 - 半乳糖基轉(zhuǎn)移酶）表達水平，結(jié)合無血清培養(yǎng)基長期馴化獲得。名稱中 “D3b" 代表在 D3a 基礎(chǔ)上第 2 輪篩選的優(yōu)勢克隆，標識其在糖基化與分泌效率上的升級特性。經(jīng)改造后，細胞分泌蛋白的半乳糖基化比例提升 20%，唾液酸含量增加 15%，更接近人源糖譜（UPLC 檢測）。

  • 形態(tài)與增殖：體外培養(yǎng)呈上皮樣形態(tài)，貼壁生長時排列緊密，懸浮培養(yǎng)形成直徑 30-50μm 的聚集體，細胞圓潤透亮，活力長期維持在 94% 以上。37℃、5% CO?條件下，增殖周期約 28-34 小時，適應(yīng)無血清化學(xué)限定培養(yǎng)基（如 Gibco CD OptiCHO），高密度流加培養(yǎng)細胞密度可達 1.1×10?個 /mL，傳代 100 次以上蛋白表達量衰減＜6%，凍存復(fù)蘇存活率超 92%。

  • 表達特征：重組蛋白表達量達 6-8g/L（流加培養(yǎng)），較 D3a 提升 15%-20%，尤其擅長表達含多結(jié)構(gòu)域的復(fù)雜蛋白（如融合蛋白、凝xue因子）。以重組人凝xue因子 VIII 為例，其分泌效率比 D3a 高 25%，糖鏈完整性達 98%，體內(nèi)凝血活性提升 10%-15%，符合國際藥典對復(fù)雜糖蛋白的質(zhì)量要求。

二、核心應(yīng)用領(lǐng)域

  1. 復(fù)雜重組蛋白生產(chǎn)

該細胞系是含多聚糖修飾蛋白的優(yōu)選生產(chǎn)基質(zhì)，在凝xue因子、溶酶體酶等藥物生產(chǎn)中表現(xiàn)突出。生產(chǎn)重組人 α- 半乳糖苷酶時，其糖基化位點占有率 100%，甘露糖 - 6 - 磷酸標記率達 85%（遠超普通株系的 60%），酶靶向遞送效率提升 30%，顯著增強對戈謝病的治療效果；生產(chǎn)重組人凝xue因子 IX 時，γ- 羧基化比例達 92%，比活性達 350IU/mg，減少臨床給藥劑量。

  1. 糖基化依賴型抗體研發(fā)

針對需特定糖型增強效應(yīng)功能的抗體（如抗 PD-L1 單抗），其生產(chǎn)的抗體巖藻糖含量可穩(wěn)定控制在 5%-8%，ADCC 活性比普通 CHO 細胞產(chǎn)品高 2-3 倍；同時，通過培養(yǎng)基調(diào)控可微調(diào)唾液酸含量（波動范圍 ±3%），滿足不同抗體對藥代動力學(xué)的需求（如延長半衰期或增強組織穿透性）。

  1. 生產(chǎn)工藝優(yōu)化研究

因?qū)ε囵B(yǎng)參數(shù)響應(yīng)敏感，該細胞系常作為模型用于生物藥生產(chǎn)工藝開發(fā)。通過調(diào)整培養(yǎng)基中銅離子濃度（5-15μM），可調(diào)控抗體 Fc 段巖藻糖含量；優(yōu)化流加補料時機（細胞密度 4×10?個 /mL 時啟動），可使目標蛋白表達量再提升 12%，為工業(yè)化生產(chǎn)提供精準工藝參數(shù)。
三、培養(yǎng)方法

  • 貼壁培養(yǎng)操作：

  1. 復(fù)蘇：從液氮中取出凍存管，37℃水浴快速解凍（1-2 分鐘），無菌操作轉(zhuǎn)移至含 10mL 預(yù)熱培養(yǎng)基（CD OptiCHO+4mM 谷an酰胺）的離心管，1000rpm 離心 5 分鐘，棄上清后重懸細胞，接種至 T75 培養(yǎng)瓶，37℃、5% CO?培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)。

  1. 換液：接種后 48 小時首ci換液，棄去舊培養(yǎng)基，加入 10mL 新鮮培養(yǎng)基，此后每 24-36 小時換液一次，維持葡萄糖濃度＞2g/L。

  1. 傳代：當細胞融合度達 70%-80% 時，棄培養(yǎng)基，PBS 清洗 2 次，加入 2mL 0.25% yi酶 - EDTA，37℃孵育 3-5 分鐘，鏡檢觀察細胞脫落，加入 5mL 培養(yǎng)基終止消化，1000rpm 離心 5 分鐘，按 1:3-1:5 比例傳代至新培養(yǎng)瓶。

  • 懸浮培養(yǎng)操作：

  1. 種子培養(yǎng)：從貼壁細胞過渡至懸浮培養(yǎng)時，以 2×10?個 /mL 密度接種至 125mL 搖瓶（工作體積 30mL），搖床轉(zhuǎn)速 120rpm，37℃、5% CO?培養(yǎng)，每日取樣計數(shù)，維持細胞密度＜6×10?個 /mL。

  1. 高密度培養(yǎng)：采用 500mL 搖瓶或生物反應(yīng)器，初始接種密度 3×10?個 /mL，流加補料（含葡萄糖、氨基酸、維生素），控制溶氧 30%-50%、pH 7.0-7.2，培養(yǎng) 7-10 天至細胞密度峰值后收獲上清。

  • 凍存流程：取對數(shù)生長期細胞，1000rpm 離心 5 分鐘，用凍存液（90% 無血清培養(yǎng)基 + 10% DMSO）重懸至 1×10?個 /mL，分裝至凍存管，程序降溫盒 - 80℃過夜，次日轉(zhuǎn)移至液氮長期保存。

四、優(yōu)勢與局限性

  • 優(yōu)勢：糖基化修飾更接近人源，復(fù)雜蛋白活性提升顯著；懸浮培養(yǎng)適應(yīng)性強，可直接放大至 2000L 生物反應(yīng)器；對工藝參數(shù)調(diào)控響應(yīng)穩(wěn)定，便于實現(xiàn)糖型精準控制；長期傳代后蛋白表達與糖譜特性無明顯漂移，批間差異＜5%。

  • 局限性：培養(yǎng)成本比普通 CHO 細胞高 15%-20%；對培養(yǎng)基中微量元素濃度敏感，需嚴格質(zhì)控；部分高粘度蛋白易形成聚集體（比例 1%-3%），需優(yōu)化純化工藝。

五、研究意義

CHO-D3b 細胞系的開發(fā)推動了復(fù)雜生物藥生產(chǎn)的精準化與高效化，其糖基化調(diào)控能力為解決重組蛋白活性不足、藥代動力學(xué)差等問題提供了方案。在基礎(chǔ)研究中，其助力解析糖基化修飾與蛋白功能的關(guān)聯(lián)；在產(chǎn)業(yè)應(yīng)用中，其支持了多個臨床級復(fù)雜蛋白藥物的工藝開發(fā)，為提升生物藥質(zhì)量、降低治療成本提供了關(guān)鍵工具，推動生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)向 “精準制造" 升級。

以上信息僅供參考，詳細信息請聯(lián)系我們。

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