人高分化結(jié)腸腺癌細(xì)胞系
人高分化結(jié)腸腺癌細(xì)胞系，是源自人結(jié)腸腺癌組織、經(jīng)體外長(zhǎng)期培養(yǎng)建系的穩(wěn)定細(xì)胞株，核心特性是呈現(xiàn)高分化表型，形態(tài)與功能更接近正常結(jié)腸腺上皮細(xì)胞，惡性程度低、生長(zhǎng)速度平緩、轉(zhuǎn)移潛能弱，無(wú)支原體、細(xì)菌、真菌及病毒污染，經(jīng)多次傳代驗(yàn)證，可長(zhǎng)期穩(wěn)定培養(yǎng)。該細(xì)胞系保留結(jié)腸腺癌的核心病理生理特征，同時(shí)具備高分化細(xì)胞的典型表型，能模擬體內(nèi)高分化結(jié)腸腺癌的生長(zhǎng)、代謝及應(yīng)答特性，是結(jié)腸腺癌發(fā)病機(jī)制、分化調(diào)控、抗腫瘤藥物篩選、預(yù)后評(píng)估及臨床診療相關(guān)研究的核心工具，廣泛應(yīng)用于臨床醫(yī)學(xué)、腫瘤學(xué)、藥理學(xué)等科研領(lǐng)域，為高分化結(jié)腸腺癌基礎(chǔ)研究、藥物研發(fā)及臨床轉(zhuǎn)化提供標(biāo)準(zhǔn)化、高活性的細(xì)胞模型，尤其適用于藥物小腸吸收評(píng)價(jià)及轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制研究相關(guān)場(chǎng)景。
細(xì)胞特性
該細(xì)胞系具有明確的高分化腫瘤細(xì)胞特性及穩(wěn)定生長(zhǎng)特征，核心特性如下：細(xì)胞形態(tài)典型，呈柱狀或立方狀上皮樣，為嚴(yán)格貼壁生長(zhǎng)，胞體規(guī)整、折光性好，排列緊密呈腺管狀，與正常結(jié)腸腺上皮細(xì)胞形態(tài)相似度高，契合高分化細(xì)胞“形態(tài)接近正常細(xì)胞"的核心特點(diǎn)；細(xì)胞特異性表達(dá)結(jié)腸腺癌相關(guān)標(biāo)志物（如CK20、CEA、CA19-9等），同時(shí)高表達(dá)分化相關(guān)蛋白，經(jīng)免疫熒光、免疫印跡等方法驗(yàn)證，標(biāo)志物表達(dá)穩(wěn)定，可特異性區(qū)分于正常結(jié)腸上皮細(xì)胞及其他腫瘤細(xì)胞，部分細(xì)胞系還可表達(dá)腸道代謝相關(guān)酶系，與小腸上皮細(xì)胞功能有一定相似性；細(xì)胞純度≥95%，無(wú)雜細(xì)胞污染，無(wú)支原體、細(xì)菌、真菌及病毒污染，細(xì)胞活性≥90%，可穩(wěn)定傳代≥40代，傳代過(guò)程中高分化表型、增殖能力及標(biāo)志物表達(dá)無(wú)明顯衰退，部分細(xì)胞系可穩(wěn)定維持代謝酶活性約20天；細(xì)胞增殖速度平緩，倍增時(shí)間較長(zhǎng)，培養(yǎng)過(guò)程中無(wú)需額外誘導(dǎo)即可維持高分化表型，可穩(wěn)定分泌結(jié)腸腺癌相關(guān)蛋白及細(xì)胞因子，部分細(xì)胞系可模擬腸道轉(zhuǎn)運(yùn)功能，適用于藥物吸收相關(guān)實(shí)驗(yàn)；細(xì)胞為貼壁依賴(lài)性生長(zhǎng)，適配常規(guī)腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)體系，無(wú)需特殊包被基質(zhì)，培養(yǎng)過(guò)程中可穩(wěn)定維持細(xì)胞表型與腫瘤相關(guān)功能，符合高分化結(jié)腸腺癌細(xì)胞的核心生長(zhǎng)特性。
產(chǎn)品特點(diǎn)
本產(chǎn)品具有活性高、純度高、特異性強(qiáng)、穩(wěn)定性好、適用性廣、操作便捷等核心特點(diǎn)，同時(shí)兼具高分化細(xì)胞的獨(dú)特優(yōu)勢(shì)。細(xì)胞經(jīng)嚴(yán)格分離純化、傳代篩選及多指標(biāo)質(zhì)檢，純度≥95%，活性≥90%，細(xì)胞形態(tài)完整、排列規(guī)整，可直接用于實(shí)驗(yàn)，無(wú)需額外純化或誘導(dǎo)，降低實(shí)驗(yàn)門(mén)檻；細(xì)胞特異性ji強(qiáng)，精準(zhǔn)表達(dá)結(jié)腸腺癌相關(guān)標(biāo)志物及分化相關(guān)蛋白，保留高分化結(jié)腸腺癌細(xì)胞的病理生理特征，惡性程度低、轉(zhuǎn)移潛能弱，可有效模擬體內(nèi)高分化結(jié)腸腺癌的生長(zhǎng)狀態(tài)，同時(shí)部分細(xì)胞系可模擬腸道上皮細(xì)胞功能，保障實(shí)驗(yàn)的特異性與準(zhǔn)確性，契合高分化結(jié)腸腺癌研究及藥物吸收評(píng)價(jià)的核心需求；細(xì)胞生理功能穩(wěn)定，可長(zhǎng)期傳代培養(yǎng)，高分化表型、增殖能力及標(biāo)志物表達(dá)保持穩(wěn)定，能穩(wěn)定提供高活性高分化腫瘤細(xì)胞模型，保障實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的重復(fù)性與可靠性；適配常規(guī)腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)體系，培養(yǎng)條件溫和，操作流程簡(jiǎn)潔，無(wú)需復(fù)雜實(shí)驗(yàn)設(shè)備，適配各類(lèi)生物實(shí)驗(yàn)室及腫瘤研究機(jī)構(gòu)使用；細(xì)胞無(wú)支原體、細(xì)菌、真菌污染，質(zhì)檢嚴(yán)格，可直接用于后續(xù)腫瘤機(jī)制研究、藥物篩選、標(biāo)志物檢測(cè)、藥物轉(zhuǎn)運(yùn)及代謝研究等各類(lèi)實(shí)驗(yàn)，減少實(shí)驗(yàn)污染風(fēng)險(xiǎn)，保障實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行；適用范圍覆蓋腫瘤學(xué)、藥理學(xué)、免疫學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)等多個(gè)領(lǐng)域，可滿(mǎn)足高分化結(jié)腸腺癌發(fā)病機(jī)制、分化調(diào)控、耐藥機(jī)制、抗腫瘤藥物篩選及療效評(píng)價(jià)、藥物腸道吸收與轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制研究等多種科研場(chǎng)景需求，同時(shí)可用于與免疫細(xì)胞共培養(yǎng)，評(píng)估腫瘤免疫應(yīng)答及免yi治療效果，契合腫瘤研究及藥物研發(fā)的多元化需求。
適用范圍與樣本（細(xì)胞）處理
本產(chǎn)品適用于人高分化結(jié)腸腺癌發(fā)病機(jī)制研究、分化調(diào)控機(jī)制研究、抗腫瘤藥物篩選及療效評(píng)價(jià)、結(jié)腸腺癌相關(guān)標(biāo)志物檢測(cè)、腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移及耐藥機(jī)制研究、腫瘤免疫研究、藥物腸道吸收與轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制研究等場(chǎng)景；可用于大規(guī)模培養(yǎng)獲取細(xì)胞及細(xì)胞上清，用于結(jié)腸腺癌相關(guān)蛋白、細(xì)胞因子的檢測(cè)與純化，同時(shí)可用于藥物吸收潛力、轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制及腸道代謝相關(guān)研究；可用于免疫熒光、免疫印跡、ELISA、Transwell、劃痕實(shí)驗(yàn)、跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)實(shí)驗(yàn)等多種實(shí)驗(yàn)技術(shù)，檢測(cè)結(jié)腸腺癌標(biāo)志物表達(dá)、評(píng)估細(xì)胞增殖、侵襲轉(zhuǎn)移能力、篩選抗腫瘤藥物，同時(shí)可通過(guò)表觀滲透系數(shù)（Papp）判斷藥物吸收能力，研究藥物轉(zhuǎn)運(yùn)與代謝機(jī)制；可用于體外構(gòu)建高分化結(jié)腸腺癌模型，探究結(jié)腸腺癌發(fā)生、發(fā)展及分化調(diào)控的分子機(jī)制，部分細(xì)胞系可用于模擬體內(nèi)腸轉(zhuǎn)運(yùn)實(shí)驗(yàn)，為結(jié)腸腺癌臨床診療及藥物研發(fā)提供理論支撐；可作為工具細(xì)胞，用于抗腫瘤藥物的篩選、藥效評(píng)價(jià)、作用機(jī)制分析，輔助藥物研發(fā)與質(zhì)量控制，符合腫瘤藥物研發(fā)及藥物吸收評(píng)價(jià)的規(guī)范要求。（具體培養(yǎng)步驟、細(xì)胞維護(hù)、實(shí)驗(yàn)應(yīng)用細(xì)節(jié)請(qǐng)參考產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)）
細(xì)胞處理與培養(yǎng)需嚴(yán)格遵循無(wú)菌操作規(guī)范，避免細(xì)胞污染；收到細(xì)胞后，立即置于37℃水浴鍋中快速解凍（1-2分鐘，嚴(yán)禁反復(fù)凍融），解凍后立即加入預(yù)熱至37℃的培養(yǎng)基（結(jié)腸癌細(xì)胞專(zhuān)用基礎(chǔ)培養(yǎng)基 + 10% 胎牛血清 + 專(zhuān)用生長(zhǎng)添加劑）中，輕輕吹打混勻（動(dòng)作輕柔，避免損傷細(xì)胞），4℃、300×g 離心5分鐘，棄上清液，用培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后，接種至培養(yǎng)瓶中，置于37℃、5% CO?、飽和濕度培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；培養(yǎng)24小時(shí)后更換新鮮培養(yǎng)基，去除未貼壁的死細(xì)胞及細(xì)胞碎片，后續(xù)每2-3天更換一次培養(yǎng)液；細(xì)胞密度達(dá)到0.6–0.8×10? cells/mL時(shí)進(jìn)行傳代（適配高分化細(xì)胞平緩增殖的特點(diǎn)），傳代比例為1:2–1:3，傳代時(shí)輕輕吹打瓶底使貼壁細(xì)胞脫落，離心后重懸接種，傳代過(guò)程中可采用溫和的細(xì)胞分離方式，避免損傷細(xì)胞；該細(xì)胞可長(zhǎng)期傳代培養(yǎng)，傳代過(guò)程中需維持對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，確保高分化表型及增殖能力穩(wěn)定；如需收集細(xì)胞或上清，可在細(xì)胞狀態(tài)良好時(shí)，用PBS漂洗后處理或直接收集培養(yǎng)上清，適配各類(lèi)實(shí)驗(yàn)需求，用于藥物轉(zhuǎn)運(yùn)實(shí)驗(yàn)時(shí)可接種于多孔可滲透聚碳酸酯膜上培養(yǎng)，形成連續(xù)單層后進(jìn)行相關(guān)檢測(cè)。
儲(chǔ)存與注意事項(xiàng)
儲(chǔ)存條件
細(xì)胞凍存液（含10% DMSO、20% 胎牛血清及70% 結(jié)腸癌細(xì)胞專(zhuān)用基礎(chǔ)培養(yǎng)基）需采用程序化降溫方式，置于-80℃密封保存，長(zhǎng)期儲(chǔ)存（超過(guò)6個(gè)月）建議轉(zhuǎn)移至液氮（-196℃）中保存，嚴(yán)禁反復(fù)凍融、劇烈震蕩，防止細(xì)胞破裂、活性喪失及高分化表型改變；凍存細(xì)胞取出后需快速解凍，避免在-20℃~0℃區(qū)間停留過(guò)久，防止細(xì)胞損傷；未接種的凍存細(xì)胞需密封保存，做好標(biāo)記（細(xì)胞名稱(chēng)、凍存日期、批次），避免混淆；培養(yǎng)基需置于2～8℃避光密封保存，避免反復(fù)凍融，使用前預(yù)熱至37℃，未用完的培養(yǎng)液需密封存放，建議1周內(nèi)用完；培養(yǎng)相關(guān)試劑（DMSO、Protein G/A層析介質(zhì)、包被試劑等）需按對(duì)應(yīng)要求儲(chǔ)存，確保試劑活性，實(shí)驗(yàn)相關(guān)試劑需按需冷藏或冷凍保存，用于藥物代謝研究的相關(guān)試劑需嚴(yán)格控制儲(chǔ)存條件，符合生物制品儲(chǔ)存的規(guī)范要求。
注意事項(xiàng)
1. 所有細(xì)胞操作需嚴(yán)格遵循無(wú)菌規(guī)范，實(shí)驗(yàn)器具需提前高壓滅菌處理，接種、換液、傳代時(shí)更換吸嘴，避免交叉污染，影響細(xì)胞活性及高分化表型；細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中需保持培養(yǎng)環(huán)境穩(wěn)定，避免溫度、CO?濃度波動(dòng)，防止細(xì)胞脫壁或活性下降，同時(shí)避免劇烈震蕩，防止細(xì)胞損傷，契合細(xì)胞培養(yǎng)的無(wú)菌操作與環(huán)境控制要求，尤其用于藥物轉(zhuǎn)運(yùn)實(shí)驗(yàn)時(shí)，需嚴(yán)格控制培養(yǎng)環(huán)境以維持細(xì)胞單層完整性。
2. 細(xì)胞解凍、接種、傳代需嚴(yán)格遵循操作規(guī)范，避免反復(fù)凍融，否則會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞破裂、活性喪失，影響培養(yǎng)效果及高分化表型；解凍時(shí)需快速均勻，接種后及時(shí)置于培養(yǎng)箱中，避免細(xì)胞長(zhǎng)時(shí)間暴露在室溫下；操作過(guò)程中動(dòng)作輕柔，避免吹打過(guò)度，防止損傷細(xì)胞，影響增殖及腫瘤相關(guān)功能，保障細(xì)胞活性與高分化表型穩(wěn)定，避免因操作不當(dāng)導(dǎo)致細(xì)胞分化狀態(tài)改變。
3. 細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中需定期觀察細(xì)胞狀態(tài)，若出現(xiàn)細(xì)胞貼壁不良、脫壁、形態(tài)異常（胞體皺縮、折光性差、排列紊亂）或污染（培養(yǎng)液渾濁、出現(xiàn)絮狀物）等情況，需及時(shí)處理；培養(yǎng)基需定期更換，避免營(yíng)養(yǎng)耗盡及代謝廢物積累，同時(shí)可根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)調(diào)整傳代比例（適配高分化細(xì)胞平緩增殖特點(diǎn)），確保細(xì)胞處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，維持高分化表型穩(wěn)定，契合高分化結(jié)腸腺癌細(xì)胞的培養(yǎng)維護(hù)要點(diǎn)，用于藥物代謝實(shí)驗(yàn)時(shí)，需定期檢測(cè)細(xì)胞代謝酶活性。
4. 實(shí)驗(yàn)操作需嚴(yán)格遵循實(shí)驗(yàn)室安全規(guī)范，妥善處理廢棄細(xì)胞、培養(yǎng)液及耗材，操作含DMSO的凍存液時(shí)需做好個(gè)人防護(hù)措施（佩戴手套、口罩、護(hù)目鏡），避免皮膚接觸和吸入；避免細(xì)胞接觸強(qiáng)氧化劑、重金屬離子及蛋白變性物質(zhì)，防止干擾細(xì)胞活性及高分化表型，避免影響藥物轉(zhuǎn)運(yùn)及代謝相關(guān)實(shí)驗(yàn)結(jié)果；培養(yǎng)期間可采用無(wú)菌檢測(cè)手段定期監(jiān)測(cè)細(xì)胞無(wú)菌狀態(tài)，確保細(xì)胞質(zhì)量符合實(shí)驗(yàn)及應(yīng)用要求，契合生物實(shí)驗(yàn)室安全與質(zhì)量控制規(guī)范。
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