人肺動(dòng)脈外膜成纖維細(xì)胞
人肺動(dòng)脈外膜成纖維細(xì)胞，是分離自成人肺動(dòng)脈外膜組織的原代貼壁細(xì)胞，是肺組織間質(zhì)中核心的結(jié)構(gòu)與功能細(xì)胞。該細(xì)胞經(jīng)體外分離、純化及鑒定，α-平滑肌肌動(dòng)蛋白（α-SMA）、波形蛋白（Vimentin）免疫熒光染色驗(yàn)證陽(yáng)性，通過嚴(yán)格無(wú)菌檢測(cè)（無(wú)支原體、細(xì)菌、真菌及病毒污染），采用早期代次凍存，具備穩(wěn)定的體外培養(yǎng)特性。作為肺動(dòng)脈外膜的主要組成細(xì)胞，其核心功能是合成與降解細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）、維持肺血管結(jié)構(gòu)完整性、參與血管重塑及炎癥應(yīng)答，在肺動(dòng)脈高壓、肺血管損傷修復(fù)、纖維化及炎癥相關(guān)研究中具有關(guān)鍵地位，是探索肺血管病理機(jī)制、篩選靶向藥物及評(píng)估預(yù)后的重要細(xì)胞模型，適用于免疫印跡、免疫熒光、Transwell、膠原凝膠收縮、ELISA等多種實(shí)驗(yàn)技術(shù)，廣泛應(yīng)用于臨床醫(yī)學(xué)、呼吸病學(xué)、藥理學(xué)等科研領(lǐng)域。
細(xì)胞特性
該細(xì)胞具有明確的細(xì)胞表型及功能特征，核心特性如下：細(xì)胞形態(tài)典型，呈梭形或紡錘形，為嚴(yán)格貼壁生長(zhǎng)，胞體透亮、突起豐富，匯合后呈平行排列的漩渦狀或峰狀單層，符合成纖維細(xì)胞的典型形態(tài)特征；細(xì)胞特異性表達(dá)成纖維細(xì)胞特征性標(biāo)志物波形蛋白（Vimentin），部分活化狀態(tài)細(xì)胞可表達(dá)α-平滑肌肌動(dòng)蛋白（α-SMA），低表達(dá)或不表達(dá)上皮及內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)志物，可特異性區(qū)分于其他細(xì)胞類型，經(jīng)免疫熒光、免疫印跡等方法驗(yàn)證，標(biāo)志物表達(dá)穩(wěn)定；細(xì)胞純度≥90%，無(wú)內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞及上皮細(xì)胞污染，無(wú)支原體、細(xì)菌、真菌及病毒污染，細(xì)胞活性≥90%，每瓶?jī)龃婕?xì)胞數(shù)≥1×10?個(gè)，可穩(wěn)定傳代至3-5代，早期代次（P2-P3）功能與形態(tài)保持zui'jia佳；細(xì)胞具備活躍的細(xì)胞外基質(zhì)合成與代謝能力，可分泌Ⅰ型、Ⅲ型膠原蛋白及彈性蛋白，在炎癥因子或機(jī)械刺激下可活化并分泌大量促炎及促纖維化因子，是肺血管重塑的核心效應(yīng)細(xì)胞之一；細(xì)胞為貼壁依賴性生長(zhǎng)，適配常規(guī)成纖維細(xì)胞培養(yǎng)體系，推薦使用纖維連接蛋白包被以增強(qiáng)貼壁與功能，培養(yǎng)過程中可穩(wěn)定維持細(xì)胞表型與生理功能。
產(chǎn)品特點(diǎn)
本產(chǎn)品具有活性高、純度高、特異性強(qiáng)、穩(wěn)定性好、適用性廣、操作便捷等核心特點(diǎn)。細(xì)胞經(jīng)嚴(yán)格組織消化、密度梯度離心及差速貼壁法純化，純度≥90%，活性≥90%，細(xì)胞形態(tài)完整、突起清晰，可直接用于實(shí)驗(yàn)，無(wú)需額外純化或誘導(dǎo)，降低實(shí)驗(yàn)門檻；細(xì)胞特異性ji強(qiáng)，精準(zhǔn)來(lái)源于肺動(dòng)脈外膜，保留肺血管外膜成纖維細(xì)胞te有的表型與功能，能有效模擬肺血管外膜在生理及病理狀態(tài)下的反應(yīng)，區(qū)別于其他部位成纖維細(xì)胞，保障實(shí)驗(yàn)的特異性與準(zhǔn)確性；細(xì)胞生理功能穩(wěn)定，早期代次凍存，傳代過程中細(xì)胞形態(tài)、增殖能力及基質(zhì)合成功能無(wú)明顯衰退，能穩(wěn)定提供高活性原代細(xì)胞模型，保障實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的重復(fù)性與可靠性；適配常規(guī)成纖維細(xì)胞培養(yǎng)體系，培養(yǎng)條件溫和，操作流程簡(jiǎn)潔，無(wú)需復(fù)雜實(shí)驗(yàn)設(shè)備，適配各類基礎(chǔ)及轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室使用；細(xì)胞無(wú)支原體、細(xì)菌、真菌污染，質(zhì)檢嚴(yán)格，可直接用于后續(xù)細(xì)胞功能研究、血管重塑實(shí)驗(yàn)、藥物篩選等各類實(shí)驗(yàn)，減少實(shí)驗(yàn)污染風(fēng)險(xiǎn)，保障實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行；適用范圍覆蓋呼吸病學(xué)、藥理學(xué)、免疫學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)等多個(gè)領(lǐng)域，可滿足肺血管疾病機(jī)制、成纖維細(xì)胞功能、基質(zhì)代謝、藥物篩選等多種科研場(chǎng)景需求，同時(shí)可用于與肺動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞或平滑肌細(xì)胞共培養(yǎng)，構(gòu)建肺血管壁三維模型，研究細(xì)胞間相互作用。
適用范圍與樣本（細(xì)胞）處理
本產(chǎn)品適用于肺血管疾病研究、成纖維細(xì)胞功能研究、基質(zhì)代謝研究、藥物篩選與評(píng)價(jià)、共培養(yǎng)模型構(gòu)建等場(chǎng)景；可用于肺動(dòng)脈高壓（PAH）、肺血管重塑、肺纖維化等疾病的發(fā)病機(jī)制研究，探究成纖維細(xì)胞的增殖、遷移、凋亡、活化及信號(hào)通路調(diào)控機(jī)制；可用于細(xì)胞外基質(zhì)（膠原蛋白、彈性蛋白）的合成與降解機(jī)制研究，探索血管壁硬度及結(jié)構(gòu)維持的分子基礎(chǔ)；可用于抗肺纖維化、抗血管重塑及抗炎藥物的體外篩選與藥效評(píng)價(jià)，為藥物研發(fā)提供支撐；可與肺動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞或平滑肌細(xì)胞共培養(yǎng)，構(gòu)建肺血管壁三維模型，研究細(xì)胞間相互作用及肺血管重塑的協(xié)同機(jī)制。（具體培養(yǎng)步驟、細(xì)胞維護(hù)、實(shí)驗(yàn)應(yīng)用細(xì)節(jié)請(qǐng)參考產(chǎn)品說明書）
細(xì)胞處理與培養(yǎng)需嚴(yán)格遵循無(wú)菌操作規(guī)范，避免細(xì)胞污染；收到細(xì)胞后，立即置于37℃水浴鍋中快速解凍（1-2分鐘，嚴(yán)禁反復(fù)凍融），解凍后立即加入預(yù)熱至37℃的培養(yǎng)基（成纖維細(xì)胞專用基礎(chǔ)培養(yǎng)基 + 10% 胎牛血清 + 專用生長(zhǎng)添加劑）中，輕輕吹打混勻（動(dòng)作輕柔，避免損傷細(xì)胞突起），4℃、300×g 離心5分鐘，棄上清液，用培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后，接種至經(jīng)纖維連接蛋白包被的培養(yǎng)瓶中，置于37℃、5% CO?、飽和濕度培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；培養(yǎng)24小時(shí)后更換新鮮培養(yǎng)基，去除未貼壁的死細(xì)胞及細(xì)胞碎片，后續(xù)每2-3天更換一次培養(yǎng)液；細(xì)胞匯合度達(dá)80%-90%時(shí)進(jìn)行傳代，傳代比例為1:2–1:3，傳代時(shí)采用溫和的細(xì)胞分離方式，輕輕吹打瓶底使貼壁細(xì)胞脫落，離心后重懸接種，避免損傷細(xì)胞；該細(xì)胞為原代細(xì)胞，建議在P3代前完成核心實(shí)驗(yàn)，以保證細(xì)胞的基質(zhì)合成及活化功能穩(wěn)定；如需收集細(xì)胞或上清，可在細(xì)胞狀態(tài)良好時(shí)，用PBS漂洗后處理或直接收集培養(yǎng)上清，適配各類實(shí)驗(yàn)需求。
儲(chǔ)存與注意事項(xiàng)
儲(chǔ)存條件
細(xì)胞凍存液（含10% DMSO、20% 胎牛血清及70% 成纖維細(xì)胞專用基礎(chǔ)培養(yǎng)基）需采用程序化降溫盒（-1℃/min）緩慢降溫，置于-80℃密封保存，長(zhǎng)期儲(chǔ)存（超過6個(gè)月）建議轉(zhuǎn)移至液氮（-196℃）中保存，嚴(yán)禁反復(fù)凍融、劇烈震蕩，防止細(xì)胞破裂、活性喪失及功能衰退；凍存細(xì)胞取出后需快速解凍，避免在-20℃~0℃區(qū)間停留過久，防止細(xì)胞損傷；未接種的凍存細(xì)胞需密封保存，做好標(biāo)記（細(xì)胞名稱、凍存日期、批次、代次），避免混淆；培養(yǎng)基需置于2～8℃避光密封保存，避免反復(fù)凍融，使用前預(yù)熱至37℃，未用完的培養(yǎng)液需密封存放，建議1周內(nèi)用完；培養(yǎng)相關(guān)試劑（DMSO、包被試劑、生長(zhǎng)添加劑等）需按對(duì)應(yīng)要求儲(chǔ)存，確保試劑活性，實(shí)驗(yàn)相關(guān)試劑需按需冷藏或冷凍保存，符合生物制品儲(chǔ)存的規(guī)范要求。
注意事項(xiàng)
1. 所有細(xì)胞操作需嚴(yán)格遵循無(wú)菌規(guī)范，實(shí)驗(yàn)器具需提前高壓滅菌處理，接種、換液、傳代時(shí)更換吸嘴，避免交叉污染，影響細(xì)胞活性及功能；細(xì)胞培養(yǎng)過程中需保持培養(yǎng)環(huán)境穩(wěn)定，避免溫度、CO?濃度波動(dòng)，防止細(xì)胞脫壁或活性下降，同時(shí)避免劇烈震蕩，防止細(xì)胞突起損傷，契合細(xì)胞培養(yǎng)的無(wú)菌操作與環(huán)境控制要求。
2. 細(xì)胞解凍、接種、傳代需嚴(yán)格遵循操作規(guī)范，避免反復(fù)凍融，否則會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞破裂、活性喪失，影響培養(yǎng)效果及功能；解凍時(shí)需快速均勻，接種后及時(shí)置于培養(yǎng)箱中，避免細(xì)胞長(zhǎng)時(shí)間暴露在室溫下；操作過程中動(dòng)作輕柔，避免吹打過度，防止損傷細(xì)胞突起，影響細(xì)胞間連接及生理功能，保障細(xì)胞活性與功能穩(wěn)定。
3. 細(xì)胞培養(yǎng)過程中需定期觀察細(xì)胞狀態(tài)，若出現(xiàn)細(xì)胞貼壁不良、脫壁、形態(tài)異常（胞體皺縮、折光性差、突起消失）或污染（培養(yǎng)液渾濁、出現(xiàn)絮狀物）等情況，需及時(shí)處理；培養(yǎng)基需定期更換，避免營(yíng)養(yǎng)耗盡及代謝廢物積累，同時(shí)可根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)調(diào)整傳代比例，確保細(xì)胞處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，維持功能穩(wěn)定，契合原代成纖維細(xì)胞的培養(yǎng)維護(hù)要點(diǎn)，建議定期觀察細(xì)胞活化狀態(tài)。
4. 實(shí)驗(yàn)操作需嚴(yán)格遵循實(shí)驗(yàn)室安全規(guī)范，妥善處理廢棄細(xì)胞、培養(yǎng)液及耗材，操作含DMSO的凍存液時(shí)需做好個(gè)人防護(hù)措施（佩戴手套、口罩、護(hù)目鏡），避免皮膚接觸和吸入；避免細(xì)胞接觸強(qiáng)氧化劑、重金屬離子及蛋白變性物質(zhì)，防止干擾細(xì)胞活性及功能；培養(yǎng)期間可采用無(wú)菌檢測(cè)手段定期監(jiān)測(cè)細(xì)胞無(wú)菌狀態(tài)，確保細(xì)胞質(zhì)量符合實(shí)驗(yàn)及應(yīng)用要求，契合生物實(shí)驗(yàn)室安全與質(zhì)量控制規(guī)范。
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