VERO細(xì)胞衍生株

檢測原理

產(chǎn)品特點(diǎn)

• 純度高：細(xì)胞純度≥95%，經(jīng)形態(tài)學(xué)鑒定、免疫組化染色及微生物檢測（細(xì)菌、真菌、支原體、病毒），均無雜細(xì)胞及微生物污染，可直接用于實(shí)驗(yàn)，能有效保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和重復(fù)性，契合疫苗研發(fā)及病毒學(xué)實(shí)驗(yàn)的嚴(yán)格要求；

• 生物學(xué)特性穩(wěn)定：細(xì)胞貼壁性好、增殖能力穩(wěn)定，連續(xù)傳代15-20代后，仍能保持其典型形態(tài)、特異性標(biāo)志物表達(dá)及病毒支持功能，無明顯變異，實(shí)驗(yàn)重復(fù)性強(qiáng)，且遺傳穩(wěn)定性高，傳代過程中不易發(fā)生基因變異，符合生物制品生產(chǎn)的細(xì)胞庫要求；

• 功能完整性：保留VERO細(xì)胞母株的核心功能，同時(shí)具備優(yōu)化后的病毒敏感性，可高效支持多種病毒（流感病毒、新冠病du、狂犬病毒、脊灰病毒等）的增殖，干擾素分泌缺陷特性穩(wěn)定，能真實(shí)模擬病毒在體內(nèi)的增殖過程，實(shí)驗(yàn)結(jié)果具有良好的應(yīng)用相關(guān)性，部分衍生株可使病毒滴度大幅提升；

• 操作便捷：采用標(biāo)準(zhǔn)化培養(yǎng)體系，解凍后可快速復(fù)蘇（復(fù)蘇存活率≥85%），培養(yǎng)條件溫和（常規(guī)37℃、5% CO?培養(yǎng)），無需特殊試劑及復(fù)雜操作，適合常規(guī)實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)與操作，同時(shí)可適應(yīng)大規(guī)模培養(yǎng)需求，降低實(shí)驗(yàn)及生產(chǎn)門檻，可參考標(biāo)準(zhǔn)化細(xì)胞培養(yǎng)流程進(jìn)行復(fù)蘇、傳代操作；

• 適用性廣：可用于多種科研及生產(chǎn)相關(guān)場景，包括病毒分離與鑒定、病毒學(xué)機(jī)制研究、疫苗（流感疫苗、xin冠yi苗、狂犬疫苗等）研發(fā)與生產(chǎn)工藝優(yōu)化、抗病du藥物篩選、生物制品質(zhì)量控制等，滿足不同科研及生產(chǎn)需求，同時(shí)可用于細(xì)胞凍存與復(fù)蘇相關(guān)實(shí)驗(yàn)、病毒培養(yǎng)條件優(yōu)化等場景，安全性已得到充分認(rèn)證，可用于人用疫苗相關(guān)研發(fā)。

適用樣本類型

• 細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)：包括細(xì)胞增殖、凋亡、周期及病毒感染后的細(xì)胞應(yīng)答等基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)，用于研究其生物學(xué)行為及病毒感染機(jī)制，可開展細(xì)胞消化、傳代、凍存等相關(guān)操作優(yōu)化實(shí)驗(yàn)，同時(shí)可用于細(xì)胞庫建立相關(guān)實(shí)驗(yàn)；

• 藥物篩選與藥效評估：用于抗病du藥物、疫苗佐劑的體外篩選，檢測藥物對病毒增殖、細(xì)胞病變（CPE）的抑制作用，評估藥物療效及疫苗安全性，為病毒相關(guān)疾病的藥物及疫苗研發(fā)提供支撐，可用于疫苗滅活工藝的驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)；

• 分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)：用于病毒相關(guān)基因、蛋白表達(dá)檢測，如RT-PCR、Western blot、免疫組化等實(shí)驗(yàn)，探究病毒與細(xì)胞的相互作用機(jī)制，為病毒學(xué)研究及疫苗研發(fā)提供新思路，可用于病毒全基因組測序相關(guān)樣本制備；

• 生物制品研發(fā)：用于疫苗生產(chǎn)工藝優(yōu)化、病毒種子培養(yǎng)、生物制品質(zhì)量控制等，可作為病毒培養(yǎng)的載體細(xì)胞，支持流感、新冠、狂犬等多種疫苗的研發(fā)與生產(chǎn)，可用于三級細(xì)胞庫的建立與檢定；

• 其他：可用于病毒分離與鑒定、細(xì)胞共培養(yǎng)、病毒感染模型構(gòu)建、細(xì)胞凍存與復(fù)蘇相關(guān)實(shí)驗(yàn)等科研場景，具體應(yīng)用可結(jié)合實(shí)驗(yàn)需求調(diào)整，同時(shí)可用于驗(yàn)證新型培養(yǎng)技術(shù)對細(xì)胞增殖及病毒支持能力的影響，需注意細(xì)胞使用代次，建議使用160代以前的細(xì)胞用于相關(guān)實(shí)驗(yàn)及研發(fā)。

儲存與注意事項(xiàng)

（一）儲存條件

• 凍存細(xì)胞：置于-196℃液氮中長期儲存，優(yōu)先選擇處于對數(shù)生長期的細(xì)胞進(jìn)行凍存，凍存時(shí)需使用含20%FBS、10%DMSO的專用凍存液，儲存時(shí)需確保液氮液位穩(wěn)定，避免細(xì)胞反復(fù)凍融（凍融次數(shù)≤3次），否則會導(dǎo)致細(xì)胞活性下降、死亡或生物學(xué)特性改變，凍存后可在半年后復(fù)蘇檢測細(xì)胞存活率，確保細(xì)胞狀態(tài)良好，凍存細(xì)胞不宜長期存儲在-80℃環(huán)境中，應(yīng)盡快轉(zhuǎn)移至液氮罐中，建立規(guī)范的細(xì)胞庫管理體系；

• 復(fù)蘇后細(xì)胞：復(fù)蘇后的細(xì)胞需立即放入37℃水浴鍋中快速晃動融化（時(shí)間控制在1分鐘內(nèi)），以1000r/min的速度離心5分鐘，去除凍存液中的DMSO后，接種至含培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中，置于37℃、5% CO?、飽和濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，24-48小時(shí)后更換培養(yǎng)基，去除死細(xì)胞，新復(fù)蘇細(xì)胞24小時(shí)內(nèi)避免頻繁觀察和更換培養(yǎng)基，防止影響細(xì)胞貼壁，將培養(yǎng)瓶放入培養(yǎng)箱時(shí)，可輕輕旋松瓶蓋以保證氣體充分交換（若使用透氣性瓶蓋則無需旋松）；

• 培養(yǎng)基儲存：配套培養(yǎng)基需置于4℃冷藏儲存，避免高溫、強(qiáng)光直射，儲存期限不超過1個(gè)月，使用前需恢復(fù)至室溫并輕輕搖勻，解凍血清時(shí)需逐步解凍，避免快速變溫，防止產(chǎn)生血清沉淀物，血清中出現(xiàn)的纖維蛋白、磷酸鈣等沉淀物不影響細(xì)胞生長，可通過離心去除，除非必要，避免對血清進(jìn)行熱滅活處理，培養(yǎng)基配方可根據(jù)病毒培養(yǎng)需求適當(dāng)調(diào)整；

• 運(yùn)輸條件：細(xì)胞運(yùn)輸采用干冰低溫運(yùn)輸（-80℃），運(yùn)輸過程中需做好防震、防潮措施，避免溫度波動，運(yùn)輸時(shí)間不超過72小時(shí)，接收后立即放入對應(yīng)儲存環(huán)境，若無法立即儲存，可在干冰上暫時(shí)保存，避免常溫放置過久，運(yùn)輸過程中需做好細(xì)胞標(biāo)識，防止混淆。

（二）注意事項(xiàng)

• 本產(chǎn)品僅用于科研及生物制品研發(fā)，嚴(yán)禁用于臨床診斷、治療或其他非科研用途，嚴(yán)禁直接接觸人體或用于人體相關(guān)實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)過程中需嚴(yán)格遵循動物實(shí)驗(yàn)相關(guān)倫理要求，未預(yù)約者不得進(jìn)行細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，細(xì)胞使用需符合生物制品生產(chǎn)相關(guān)規(guī)范；

• 細(xì)胞復(fù)蘇、培養(yǎng)、傳代需嚴(yán)格遵循無菌操作原則，實(shí)驗(yàn)環(huán)境需符合細(xì)胞培養(yǎng)要求，實(shí)驗(yàn)器具需經(jīng)紫外燈照射30分鐘和通風(fēng)30分鐘后使用，操作前需用75%酒精對器具進(jìn)行消毒，避免微生物污染；傳代時(shí)需控制消化時(shí)間，當(dāng)細(xì)胞明顯變圓、細(xì)胞間隙增大并呈現(xiàn)流沙狀時(shí)停止消化，不同衍生株消化時(shí)間可根據(jù)細(xì)胞特性調(diào)整，每隔30秒觀察一次細(xì)胞狀態(tài)，避免過度消化損傷細(xì)胞，貼壁細(xì)胞傳代前需用5mL PBS輕輕潤洗細(xì)胞，避免沖擊細(xì)胞層，潤洗后吸去PBS再進(jìn)行消化操作，傳代過程中需控制細(xì)胞接種密度，確保細(xì)胞正常增殖；

• 細(xì)胞培養(yǎng)過程中，需定期觀察細(xì)胞形態(tài)、生長狀態(tài)及有無細(xì)胞病變（CPE），若培養(yǎng)基出現(xiàn)偏紫，多為CO?溢出導(dǎo)致堿性增加，可輕輕旋松瓶蓋放入培養(yǎng)箱校正，變紫培養(yǎng)基可繼續(xù)使用；若培養(yǎng)液變黃或變濁，可能是細(xì)胞密度過高或細(xì)菌污染，需及時(shí)消化傳代或丟棄處理；若發(fā)現(xiàn)真菌或霉菌污染，需用紫外燈照射培養(yǎng)箱去除孢子，并進(jìn)行消毒；病毒感染實(shí)驗(yàn)后，需對細(xì)胞及廢液進(jìn)行嚴(yán)格滅菌處理；

• 處理細(xì)胞支原體污染時(shí)，建議優(yōu)先更換新的細(xì)胞株，若細(xì)胞珍貴，可嘗試使用四環(huán)素、大環(huán)內(nèi)酯類抗生素等進(jìn)行治療，支原體污染易復(fù)發(fā)，需做好后續(xù)監(jiān)測，支原體污染會影響病毒增殖效率，需嚴(yán)格控制；

• 細(xì)胞換液時(shí)機(jī)可根據(jù)細(xì)胞狀態(tài)調(diào)整，傳代后隔天或隔兩天換液為宜，若死細(xì)胞較多可第二天換液，生長速度較慢的衍生株可減少換液次數(shù)，細(xì)胞分布不均時(shí)可消化重鋪，病毒感染期間可根據(jù)病毒增殖情況調(diào)整換液頻率；

• 凍存細(xì)胞時(shí)，需將細(xì)胞懸液以1000-1200r/min離心3-5分鐘，丟棄上清液后用預(yù)冷的凍存液重懸細(xì)胞，細(xì)胞密度控制在1×10?~1×10?個(gè)/ml，分裝后標(biāo)記細(xì)胞種類、凍存時(shí)間、衍生株類型及操作人員，放入程序降溫盒置于-80℃過夜后，再轉(zhuǎn)移至液氮中長期儲存，建立細(xì)胞凍存臺賬，便于追溯；

• 取出液氮罐中的細(xì)胞時(shí)，務(wù)必加強(qiáng)個(gè)人防護(hù)，避免凍傷；取材及細(xì)胞操作時(shí)動作要輕，避免牽拉和擠壓造成細(xì)胞機(jī)械損傷，切忌用水直接沖洗細(xì)胞，可用0.1M PBS輕輕沖洗；病毒感染實(shí)驗(yàn)中，操作人員需做好二級防護(hù)，避免病毒泄露；

• 實(shí)驗(yàn)過程中產(chǎn)生的細(xì)胞廢液、廢棄培養(yǎng)基及用過的培養(yǎng)耗材，需經(jīng)滅菌處理后再丟棄，避免生物污染及病毒泄露；操作人員需穿戴無菌手套、口罩、實(shí)驗(yàn)服，做好個(gè)人防護(hù)，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后及時(shí)消毒實(shí)驗(yàn)臺面，實(shí)驗(yàn)廢棄物需按生物安全規(guī)范處理。

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